BL21大肠杆菌菌株使用说明.pdf

BL21大肠杆菌菌株 编号 名称 北京华越洋生物NRR01290 BL21 大肠杆菌菌株 基本信息： 名称 BL21 大肠杆菌菌株 规格 300ul 甘油菌 类别 大肠杆菌表达菌株 抗性 无 培养基 LB 培养温度 37℃ 保存方式 20%甘油，-80℃ 基因型 F-, ompT, hsdSB (rB-mB-), gal, dcm 菌株简介: E.coli BL21 来源于 B 株, 是最早开发的用于原核表达的菌株，为 Lon 蛋白水解酶、ompT 外膜蛋白水解酶缺陷型，因此表达的外源蛋白在该体 系中具有更高的稳定性。本制品有利于外源蛋白的稳定表达。 本菌株可用于 pCold I-IV DNA 和 pCold TF DNA 的蛋白质表达，但不适 合于启动子为 T7 的蛋白质表达体系，如 pET 系列，因为 BL21 宿主不表 达 T7 RNA 聚合酶。另外，不建议使用此菌株构建或制备质粒，因为它不 是 recA 基因缺失型菌株。 该菌株主要用于非毒性蛋白的表达，不含 T7 RNA 聚合酶，所以不能用 于由 T7 启动子驱动的蛋白表达(如：pET 系列)；但含有大肠杆菌 RNA 聚 合酶，可以用于 tac 或 trc 等使用大肠杆菌 RNA 聚合酶的原核系统的表达 （如：pGEX，pMAL 质粒）。 操作说明： 1，本品包含一份甘油菌，使用本甘油菌时可以不用完全融解，在甘油菌表 面蘸取少量涂板或进行液体培养即可。也可以完全融解后使用，但随着冻融次数 的增加，细菌的活力会逐渐下降。 2，为保证菌种纯正，避免其它细菌污染，尽量先划平板，然后再挑单克隆 菌落进行后续操作。 冷冻管开封： 用浸过75%酒精的脱脂棉严格消毒冷冻管盖。 菌株复溶： 无菌环境中旋开装有复溶液的滴瓶盖，吸取 1ml 左右复溶液，加入到冷冻 管中。轻轻振荡，使冻干菌株溶解呈悬浮状。 菌株复壮： 用无菌吸管吸取菌悬液，转移到复溶液滴瓶中。做好标识，在适宜温度下培 养。细菌在30-35℃培养箱中培养24-48h，真菌在23-28℃培养箱中培养24-72h （必要时，可适当延长培养时间）。 菌株传代： 将得到的菌株的新鲜培养物转接到适宜的固体培养基及液体培养基中（尽量 增大接种量：如用无菌吸管吸取≥50 μl 新鲜培养物至固体培养基，边移动边缓 慢释放），适宜温度下培养，用以菌株的保藏、传代及制备工作菌株。 注意事项： 1、菌种活化前，将冷冻管保存在低温、清洁、干燥的环境中，长时间室温下放 置会导致菌种衰退； 2、冷冻管开封、冻干粉复溶、菌株恢复培养等操作应在无菌条件下进行； 3、一些菌种经过冷冻干燥保存后，延迟期较长，部分需连续两次继代培养才能 正常生长； 4、苛养菌的培养需采用含特定营养成分的培养基，敬请正确选择，不清楚时来 电询问； 5、某些厌氧菌的培养，自开封到接种完成，均需以无氧气体充填，以保持厌氧 状态；培养过程中亦要保持厌氧状态； 6、某些菌种，如肺炎链球菌、流感嗜血杆菌、淋病奈瑟菌等需要5-10%CO 促 2 进生长； 7、如发现冷冻管盖松动、复溶液浑浊等异常情况，应停止使用对应产品。 8、部分菌种有致病性、扩散性，请专业人员在专业环境下有保护性操作。 保藏条件： -20℃保存（复溶液于2-8℃保存） 保藏时间： 2-10 年，应根据菌种状况及时转接