Ch07克隆基因的表达.pdf

第七章 克隆基因的表达 邢万金 内蒙古大学生命科学学院生物学系 基因克隆 目的基因 载体 E. coli 克隆基因的表达 RNA Pol 第一节 外源基因在原核细胞中表达 一、原核表达真核基因的注意事项 1. 真核生物的基因用cDNA 2. 不能直接用真核基因组DNA （带有内含子） 3. 必须利用原核细胞的调控原件（启动子等） 4. 有Shine-Dalgarno （S-D ）序列 （核糖体识别） 5. 防止外源基因产物对宿主细胞的毒害 二、原核基因表达的基本元件 原核或噬菌体启动子 SD序列 MCS 终止子 RNA Pol 1. 启动子（promoter） DNA上能被RNA聚合酶识别并起始转录的序列 （1）E. coli 的启动子序列 两段一致顺序 （consensus sequence）: -35 Box 和-10 Box 大肠杆菌启动子的一致序列 转录起 -35 region -10 region 始位点 lac ACCCCAGGCTTTACACTTTATGCTTCCGGCTCGTATGTTGTGTGGAATT lacI CCATCGAATGGCGCAAAACCTTTCGCGGTATGGCATGATAGCGCCCGGA galP2 ATTTATTCCATGTCACACTTTTCGCATCTTTGTTATGCTATGGTTATTT araBAD GGATCCTACCTGACGCTTTTTATCGCAACTCTCTACTGTTTCTCCATAC araC GCCGTGATTATAGACACTTTTGTTACGCGTTTTTGTCATGGCTTTGGTC trp AAATGAGCTGTTGACAATTAATCATCGAACTAGTTAACTAGTACGCAAG bioA TTCCAAAACGTGTTTTTTGTTGTTAATTCGGTGTAGACTTGTAAACCTA bioB CATAATCGACTTGTAAACCAAATTGAAAAGATTTAGGTTTACAAGTCTA tRNAtyr CAACGTAACACTTTACAGCGGCGCGTCATTTGATATGATGCGCCCCGCT rrnD1 CAAAAAAATACTTGTGCAAAAAATTGGGATCCCTATAATGCGCCTCCGT rrnE1 CAATTTTTCTATTGCGGCCTGCGGAGAACTCCCTATAATGCGCCTCCAT rrnA1 AAAATAAATGCTTGACTCTGTAGCGGGAAGGCGTATTATGCACACCCCG 一致序列 T C T T G A C A T...11-15bp...T A T A A T...5-8bp...A51 42 38 82 84 79 64 53 45 41 79 95 44 59 51 96 C55 T48 G42 2. Shine-Dalgarno （SD）序列 原核mRNA上的与核糖体16S rRNA的3′位点互补 原核或噬菌体启动子 SD序列 MCS