PCR_DGGE研究微生物种群中多条带产生原因分析.pdf

微生物学通报 JAN 20, 2010, 37(1): 147−154 Microbiology China © 2010 by Institute of Microbiology, CAS tongbao@ 生物实验室 PCR-DGGE 研究微生物种群中多条带 产生原因分析 1 1 1 1,2* 陈章宝 向少能 江震献 周泽扬 (1. 400716) (2. 400047) 摘 要: 鸡肠道微生物菌群经PCR-DGGE 分析, 回收PCR-DGGE 分析胶上的一条DNA 片段, 回收 的DNA 片段再重复进行2 次PCR-DGGE 分析, 以及分别用PCR 反复循环扩增和PCR 高保真酶扩 增后再进行DGGE 分析等方法研究PCR-DGGE 分析中多条带产生原因。结果显示PCR-DGGE 分析 中多条带产生原因可能是作PCR 扩增模板的 DNA 混杂有少量其他DNA 片段, 多条带现象不易被 消除。DGGE 分析胶上的DNA 片段测序时, 将该DNA 片段回收、PCR 扩增后克隆, 提取多个阳性 克隆菌的质粒DNA 片段, 分别与其原目的DNA 片段进行DGGE 分析, 在DGGE 分析胶上选取与 原目的DNA 片段处于同一电泳位置的质粒DNA 测序, 提高测序的准确性。 关键词: PCR-DGGE 技术, 多条带, 原因分析, 微生物种群 Analysis on Causes of Multi-bands in Researching on Microbe Populations by PCR-DGGE CHEN Zhang-Bao1 XIANG Shao-Neng 1 JIANG Zhen-Xian1 ZHOU Ze-Yang1,2* (1. Microbiology Division, Institute of Sericulture and Systems Biology, Key Sericultural Laboratory of Agricultural Ministry , Southwest University, Chongqing 400716, China) (2. Chongqing Normal University, Chongqing 400047, China) Abstract: Microbe populations from chicken intestinal were analyzed by PCR-DGGE. DNA fragment rep- resented by a band from DGGE gel was retrieved. DNA fragment was two times repeated analyzed with PCR-DGGE, furthermore PCR reamplification and using high-fidelity DNA polymerase amplification also