第九章非发酵革兰阴性杆菌 - 中国医科大学网络教育学院.ppt

第十一章 G+需氧杆菌 第一节 炭疽芽胞杆菌 炭疽是人畜共患病，由于疫苗接种和卫生条件改善，发病率明显下降，但可作为生物武器。炭疽一年均可发生。人通过食入病菌污染的食物；也可因接触带芽胞的皮毛、尘土、干燥菌粉邮件和吸入气溶胶而感染。可引起皮肤炭疽，胃肠炭疽，肺炭疽，可并发败血症和脑膜炎。 一、微生物特性 1.本菌为致病性细菌中最大的G+杆菌。两 端平截，无鞭毛，呈竹节状排列，芽胞位于 菌体中央，有毒菌株有荚膜。 2.为需氧或兼性厌氧菌，生长条件不严格, 最适温度为30℃～35℃，形成灰色、扁平干 燥、不溶血粗糙型菌落，边缘呈卷发状，使 明胶表面液化成漏斗状。有毒菌株在血琼脂 平板上可产生荚膜，用接种针挑取时呈粘丝 状。 3.细菌性抗原 (1) 菌体多糖抗原耐热、耐腐败, 经长时间煮 沸仍可与相应免疫血清发生沉淀反应 (Ascoli热沉淀反应)。抗原特异性不高,能 与其他需氧性芽胞杆菌发生交叉反应,应 用时应作综合分析。 (2) 荚膜多肽抗原在体内有抗吞噬作用,称为 侵袭因子，有助于病菌在体内繁殖扩散 和建立感染。荚膜肿胀试验对鉴定本菌 有一定意义。 (3) 芽胞抗原具有免疫原性和血清学诊断价 值。 4. 炭疽毒素 由保护性抗原、致死因子和水肿因 子三种蛋白质形成的外毒素复合物， 后两者单独不能发挥生物活性作用， 都必须与保护性抗原组合才能引起实 验动物的水肿致死。 5. 抵抗力 本菌芽胞的抵抗力很强，在干燥土 壤或皮毛中常温下可存活数十年, 传 染性可持续数十年之久。芽胞对碘及 氧化剂较敏感, 1：2500碘液、0.5％ 过氧乙酸10min即杀死。 1. 取病灶深部标本或痰和血液；肠炭疽取 粪便或呕吐物；置65℃水溶30min，将非芽 胞菌杀死，保留芽胞活性再进行增菌和分离 培养。 2. 直接镜检发现G+大杆菌、两端平截、竹 节状排列形成长链，并有明显荚膜，可见芽 胞，芽胞为卵圆形，位于菌体中央菌体不膨 大，可作初步报告。 3. 分离培养 一般接种血琼脂平板，35℃、 18-24h后可观察到较大、灰白色、边缘不整 齐和有轻微溶血的菌落。 (1)形态学特征：包括镜检形态和菌落形态 （如上）。 (2)生化试验：能分解葡萄糖、麦芽糖、蔗 糖。有些菌株迟缓发酵甘油和水杨素， 产酸不产气。能水解淀粉。不发酵鼠李 糖、半乳糖等其他糖类。能还原硝酸盐 为亚硝酸盐。VP试验不定。不产生吲哚 和硫化氢，不利用枸橼酸盐和分解尿素。 在牛乳中生长2-4天牛乳凝固后缓慢融 化。卵磷脂酶弱阳性、触酶阳性。 取用37 ℃ 、4-6h待检肉汤培养物， 涂布于普通琼脂平板，将AP631炭疽噬 菌体1滴，于平板中央划一直线,置37℃ 18h，出现噬菌斑或噬菌带者为阳性， 每份标本应作2-3个同样的试验，同时 滴种肉汤液作阴性对照。 将待检菌接种于含青霉素0.05—0.5U/ml 的培养基经37℃培养 6 h后，炭疽杆菌可 发生形态变化，显微镜下见大而均匀的 圆球状菌体呈成串样排列，类炭疽杆菌 无此现象。 将待检菌分别接种于青霉素5、10、100U／ml的普通琼脂平板，37 ℃培养24h，炭疽芽胞杆菌一般在含5U／ml的青霉素平板上仍能生长，在含10、100U／ml青霉素的平板上受到抑制而不生长。 将待检菌新鲜肉汤培养物0.1ml滴于预 温的兔血琼脂平板上，用L形玻棒均匀涂 布，干后用含青霉素1 U／片纸片贴于平 板，37℃1—2h，低倍镜下观察，可见纸 片周围有一无菌生长的抑菌环，其外周青 霉素浓度低,菌体细胞壁受抑而成为串珠。 平板继续37℃孵育8-12h, 测量抑菌环直径。 （7）重碳酸盐生长毒力试验 将待检菌接种于含O．5％NaHCO3 和10％马血清的琼脂平板上，置10％ CO2环境37℃24-48h，有毒株形成荚 膜，菌落呈粘液型，无毒株不形成荚 膜，呈粗糙型菌落。 炭疽芽胞杆菌是惟一具有致病力，致病 物质为炭疽毒素，故对该毒素的检测显得 十分重要 取纯培养接种于肉汤培养液37℃ 24h,吸取0.1m1接种小鼠皮下,小鼠于72—96h 发病并死亡 接种部位呈胶样水肿，肝脾肿 大出血，血液黑色且不凝固：取心血、肝脾 涂片染色镜检分离培养，可检出炭疽杆菌。 (9)植物凝集试验 炭疽杆菌菌体多糖是某些植物凝集 素受体，用凝集素试验检测炭疽杆菌。 常用的方法有荧光标记试验和酶联凝 集素吸附试验。本试验可与其他类炭 疽芽胞杆菌相鉴别。 (五) 药物敏感性试