原噬菌体诱导试验研究及法医学意义.pdf

中 国 人 民 公 安 大 学 学 报 (自然科学版) 2004年 第2期 No．22004 JournalofChinesePeople’sPublic-SecurityUniversity(ScienceandTechnology) 总第40期 Sum40 原噬菌体诱导试验研究及法医学意义 薄克敏 (广东公安高等专科学校技术系，广东广州，510440) 摘 要 在遗传毒理学中有很多报道，应用原噬菌体诱导试验 ，对生活环境、工作场地中存在的某 些可疑物质进行检测，尤其是待测物质种类多、含量少时，用原噬菌体诱导试验进行筛选，快速、敏 感、可靠。试将该方法应用于法医微量物证的检验 ，会为法医物证分析提供一种新方法。 关键词 原噬菌体 诱 导试验 基 因 突变 中图分类号 Q782 并参与 DNA的修复和复制。通过测定 入的表达程 0 引言 度 ，来检测被测物质 的诱变作用及潜在危害 。某 原噬菌体诱导试验 (ProphageLnductionAssay)即 种待测物质显示了对溶原菌有诱导释放噬菌体的能 溶原细菌诱导检测法。随着药理学研究的发展，逐 力，可以推断该物质检测结果为阳性 。 渐被应用于抗癌药物的筛选 。1984年 Rossman等建 2 材料及样品制备 立了微筛法 (MicroscreenAssay)，使细菌在微滴定板 上接触样品，并首次将溶原细菌诱导方法用于检测 (1)待检样 品制成原液再稀释不 同浓度 。 环境致突变物和金属致突变物…。1986年 Elespuru (2)根据待检样品性质 ，用不同的方法消毒 、除 等使用 了微滴定板 、多管道吸管和垂直光路光度计， 菌 。 使之定量化和微量化 ，既节省了样品又缩短 了实验 (3)阳性对照 ：多用丝裂霉素 C(1t~g／m1)。 时间。因此 ，广泛应用于微量化学药物 、工业毒物的 阴性对照 ：生理盐水 、二 甲基亚砜 (1：1)。 快速检验及致 畸、致癌 、致突变物 的检测和筛选 。 (4)菌株：对 入噬菌体 敏感 的溶源性 菌株 为 将其应用于法医微量物证 的检验 ，会为法医毒物分 GY4015。 析提供一项新措施 ，为法医鉴定找 出一个新思路 ，为 大肠杆菌溶源性菌株为 GY5027。 法医科研增加一种新方法 。 (5)培养基：LB液体培养基、半固体顶层培养 基 、营养琼脂底层培养基等等 。 1 原噬菌体诱导试验 的基本原理 3 实验方法 原噬菌体诱导试验其基本原理类似于 “SOS”修 复 (error—pronerepair)理论 。在正常情况下，溶原细 一 般采用中国环境诱变剂学会推荐的方法…， 菌的染色体上整合着噬菌体 DNA和细菌 DNA。本 基本操作程序如下 ： 实验是将原噬菌体在诱变剂的作用下，使被诱导的 (1)菌种活化 ：将 GY4015和 GY5027菌株分别 溶原细菌的染色体上原来整合着 的噬菌体 DNA与 接种于 1ml的LB培养液 中，37℃水浴振动 (180次／ 细菌 DNA产生断裂，形成游离 的烈性噬菌体。此 分)培养过夜 。 时，原噬菌体状态的 cI(受阻遏基因)及其产物 入(生 (2)离心洗涤及稀释 GY5027菌株 ：将 GY5027 长功能基 因)得 以表达 ，与细胞 内靶部位发生反应 ， 培养物倒人灭菌离心管 中，