复合酶法提取甘草渣中总黄酮.pdf

No．8 亿亏与生物互军呈2008。voI．25 四 C№mIstryBioengin∞ring 复合酶法提取甘草渣中总黄酮 王芸芸。李莉，李香玉。刘利军 (宁夏大学化学化工学院，宁夏银川750021) 摘要：利用纤维素酶和果胶酶的破壁技术提取甘草渣中游离总黄酮，通过单因素实验，确定最佳酶法提取工 艺为：固液比(质量体积比)1：50，50U·mL_1纤维素酶用量O．8mL(每克甘草渣用量)，120U·g-1果胶酶用量 30 h，pH值4．5。与常规醇提法相比，游离总黄 mg(每克甘草渣用量)，乙醇质量分数95％，温度50℃，酶解时间3 酮含量提高了1．15倍。 关键词：酶法提取；纤维素酶；果胶酶；总黄嗣 中图分类号：Q814R284 文献标识码：A 文章编号：1672—5425(2008)08一0049一03 甘草黄酮具有显著的抗氧化作用，可以预防肿瘤 银川开发区和氏璧生物技术有限公司；芦丁标准品； 的发生，并具有雌性激素样作用，对胃溃疡、肝损害、解 95％乙醇、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠，分析纯，北京 痉、病原微生物、酶及抗炎、抗变态反应等都具有明显 化工厂。 的药理作用【lJ。 TU一1810型紫外可见分光光度计，北京普析通用 甘草黄酮的提取主要采用热回流法、微波法、索氏 有限责任公司；PH孓2型数字酸度计，杭州东星仪器 提取法、超声波提取的常规醇提法[1]。近年来，酶的用 厂；BS224S型电子天平，北京赛多利斯科学仪器公司。 途越来越广泛，涉及的领域也越来越多[2]。植物酶法 1．2提取方法 提取是在传统的溶剂提取方法的基础上，根据植物药 1．2．1常规醇提法 材细胞壁的构成，利用酶反应所具有的高度专一性等 称取一定量的甘草渣，加入20倍的醇，回流提取 特点，选择相应的酶，将细胞壁的组成成分水解或降 2h，提取3次，合并提取液，取样，待测。 解，破坏细胞壁结构，使有效成分充分暴露出来，溶解、 1．2．2复合酶法[33 混悬或胶溶于溶剂中，从而达到提取细胞内有效成分 称取一定量的甘草渣，加入一定量适当pH值的 的目的。由于酶制剂在常温、常压条件下就能起催化 醇，添加一定量的纤维素酶和果胶酶，在适宜的温度下 作用，能有效地提高植物药中有效成分的含量。目前 进行酶解反应。反应后将提取液煮沸2min，使酶灭 关于酶解法提取甘草总黄酮的报道较少，而用工业级 活，过滤，移取一定量的提取液，待测。 的酶从甘草渣中提取甘草总黄酮尚未见报道。 1．3分析与检测 为了进一步提高总黄酮的提取率、降低生产成本， 1．3．1标准曲线的绘制 作者采用纤维索酶和果胶酶对已经提取过甘草酸的甘 (精密称取经105℃干燥至恒重的芦丁标准品4mg 草渣进行酶解并从中提取甘草总黄酮，取得了良好的 置于10．OmL的量瓶中，加入80％乙醇溶解，并稀释 效果，为酶法提取甘草总黄酮提供了理论依据。 至刻度，摇匀，得到O．4mg·mL-1的标准溶液。精密 mL、O．2 mL、0．6mL、0．8mL、1．0 吸取O．O mL、O．4 1 实验 mL的标准溶液，分别置于10mL容量瓶中，加入5％