基因表达载体及重组质粒的区别.docVIP

载体，质粒，基因表达载体3者有何不同？载体是一种运输工具，细胞膜上的蛋白质也是一种载体，其识别很单一，也因此有了选择透过性。 质粒是一种小型环状DNA，广泛存在于微生物中，一般的基因工程中，质粒被用来当做目的基因的运载体，也是一种运输工具。 基因表达载体是目的基因和运载体连接后的产物。基因表达载体和重组质粒的区别基因表达载体的构建（即目的基因与运载体结合）是实施基因工程的第二步，也是基因工程的核心。 　　将目的基因与运载体结合的过程，实际上是不同来源的DNA重新组合的过程。如果以质粒作为运载体， 　　首先要用一定的限制酶切割质粒，使质粒出现一个缺口，露出黏性末端。然后用同一种限制酶切断目的基因，使其产生相同的黏性末端（部分限制性内切酶可切割出平末端，拥有相同效果）。将切下的目的基因的片段插入质粒的切口处，首先碱基互补配对结合，两个黏性末端吻合在一起，碱基之间形成氢键，再加入适量DNA连接酶，催化两条DNA链之间形成磷酸二酯键，从而将相邻的脱氧核糖核酸连接起来，形成一个重组DNA分子。这个重组的DNA分子也叫重组质粒。 就是这样。简单的说，重组质粒是基因表达载体的一种。 生物学上marker是什么意思从文字上说，标记（Marker），染色体上一个可以被识别的区域（比如限制性内切酶的酶切点，基因的位置等）。标记的遗传能够被检测出来。标记可以是染色体上有表达功能的部分（比如基因），也可以是没有编码蛋白质功能但遗传特性能够被检测出来的部分 从实验上说，marker有两种，一种是基因marker，一种是蛋白质marker。两种marker分别是进行琼脂糖凝胶电泳和SDS（蛋白质电泳）所用的标准参照物，用以指示目的基因或者蛋白的大小。 一般常称呼的marker都是指基因marker，即DNA marker DNA Marker 作为一种分子标记(Marker)，构建分子图谱。分子标记克隆在质粒上，可以繁殖及保存。 DNA Marker 是分子量不同的DNA片段，主要用途就是DNA 分子凝胶电泳时，加样用做对比来检测琼脂糖凝胶是否有问题。 现在常用的DNA MARKER有两种，一种是病毒等DNA经过酶切获得的，分子量大小有零有整，另外一种是固定数值的，比如100BP，200BP等。 两种MARKER都不难制作，对于第一种，稍微难一些，主要是要获得病毒等大的基因组片段，然后用适当的酶切，切割完全以后，就能得到相应的图谱。第二中实际上很简单，如果你手头有任何一个载体，而且它的序列完全清楚，那么可以采用PCR的方法获得一系列大小不同的片段，比如上游引物可以使用一个，然后用数数的方法确定下游100BP处的下游引物，扩增出的就是100BP的片段，200BP处的引物就是200BP的片段，依此类推，可以获得一系列不同大小的片段，扩增后，把它们放到一起，就获得了自制的MARKER了RNA电泳条带中的 28s 18s 5s分别代表什么？生物体内一般含有核糖体RNA（rRNA）、信使RNA（mRNA）、转运RNA(tRNA)三种主要的RNA，其中rRNA含量最多,提取组织总RNA所得最多的就是rRNA。真核生物中含有5S、5.8S、18S、28S,原核生物中有5S、16S、23S；而植物组织中一般较多的为5S、18S、28S S代表沉降系数，当用超速离心测定一个粒子的沉降速度是，此速度与粒子的大小直接成比例。5S、18S、28S分别具有120、1900和4700个核苷酸RNA 的28s/18s 指的是什么，还有，RIN怎么测定？28s和18s是真核生物rRNA（核糖体RNA）的两个主要亚基，在体内含量较多。RNA提取过程中可能发生各种途径的降解，28S/18S即为衡量提取的RNA完整性的指标，如果28S/18S为1.8~2.0表明所提取RNA完整性较好，基本无降解发生。电泳条带上应是28S在上，18S在下，且亮度为28S是18S的两倍。RIN值的测定有专门的仪器，还可以产生RNA主要条带的峰图。