Chap-8-基因工程原理与技术-测序技术与原理.pdf

基因工程原理与技术 The Principles Technology of Genetic Engineering 张金文 甘肃农业大学农学院 2010年3月 第八章 DNA测序技术 第一节 Maxam-Gilbert化学降解法 第二节 Sanger双脱氧链终止法 第三节 自动测序 第四节 高通量测序技术 基因工程原理与技术 张金文 主讲 2 DNA测序技术的出现 在DNA测序技术出现之前，蛋白质和RNA的测序技术就已经出现。 Frederick Sanger，1949年开发了测定胰岛素两条肽链氨基末端序列的技术， 1953年测定了胰岛素的氨基酸序列。Edman也在1950年提出了蛋白质的N端测序 技术，后来在此基础上发展出了蛋白质自动测序技术。 Sanger等，1965年发明了RNA的小片段序列测定法，完成了E.coli 5S rRNA的 120个核苷酸的测定。同时，Holley完成了酵母丙氨酸转运tRNA的序列测定。 1968年,美国华裔生物化学及分子生物学家吴瑞博士(Dr.Ray Wu)独创性地设计 了一种崭新的引物-延伸测序策略,并于1971测定λ phage粘性末端序列）。 1975年Sanger和Coulson发明了“加减法” 测定 DNA序列。1977年在引入双脱氧核苷三磷酸 (ddNTP)后，形成了双脱氧链终止法。 Maxam和Gilbert，1977年报道了化学降解法测 定DNA序列。 DNA序列测定技术出现后，迅速超越了蛋白质 和RNA测序技术，成为现代分子生物学中最重 要的技术。 基因工程原理与技术 张金文 主讲 3 DNA测序技术的出现 1968年，美国华裔生物化学及分子生物学家吴瑞博士（Dr.Ray Wu ） 独创性地设计了一种崭新的引物-延伸测序策略（1971 测定λ噬 菌体粘性末端序列）。 1977年，英国生物化学家F.Sanger等发展了快速测定DNA序列的末 端终止法。 1983年，美国K.Mullis完善了聚合酶链式反应（PCR ）扩增DNA的 方法。 M.Smith根据他的方法，发明了碱基定点突变技术。 后三位科学家都获得了诺贝尔奖。 基因工程原理与技术 张金文 主讲 4 DNA测序方法 Sanger双脱氧链终止法 经 典 方 法 (Sanger Coulson，1977) Maxam-Gilbert DNA化学降解法 (Maxam Gilbert，1977) 第一代测序技术 自动测序 杂交测序法 单分子测序法 新技术方法 原子探针显微镜测序法 流式细胞仪测序法 大规模平行实测法 DNA 芯片法 第二代测序技术 基因工程原理与技术