Chap-9-基因工程原理与技术-基因文库和基因克隆.pdf

基因工程原理与技术 The Principles Technology of Genetic Engineering 张金文 甘肃农业大学农学院 2010年3月 第九章 基因文库构建与目的基因克隆 第一节 基因文库的构建 第二节 基因克隆的方法和策略 基因工程原理与技术 张金文 主讲 2 目的基因的获得 基因克隆技术是分子生物学的核心技术 基因克隆目的是获得某一基因或DNA片段的大量拷贝。 有了与亲本分子完全相同的克隆分子，就可深入分析基因的结构 与功能，并可达到人为改造细胞以及物种个体的遗传性状的目的。 基因克隆的步骤包括： ① 分离制备待克隆的外源DNA片段； ② 将靶叫A片段与裁体连接，组装成杂合DNA分子； ③ 重组DNA分子转人宿主细胞， ④ 筛选重组子； ⑤ 目的基因的确认和分析。 基因工程原理与技术 张金文 主讲 3 第一节 基因文库的构建 第一节 基因文库的构建 一、基因文库的概念 基因文库（gene library） 指通过克隆方法保存在适当宿主中的某种生物、组织、 器官或细胞类型的所有DNA片段而构成的克隆集合体。 通常所说的基因文库包括： 基因组文库（genomic library） cDNA文库（cDNA library） 基因工程原理与技术 张金文 主讲 4 基因文库种类 基因组文库（ Genomic library ） 由大量的含有基因组DNA （即某一生物的全部DNA序列）的不同 DNA片段的克隆所构成的群体，称之为基因文库。一个完全的基 因文库，应该能够保证从中筛选到目的基因。 cDNA文库（cDNA library） 由某一生物的特定器官或特定发育时期细胞内的 mRNA经反转录 形成的cDNA (complementary DNA, cDNA ) ，它们所构成的重组 DNA克隆群体，则称之为cDNA基因文库。 基因工程原理与技术 张金文 主讲 5 基因文库用途 基因组文库 cDNA文库 反映基因组的全部信息 反映基因组表达的基因序 基因组物理图谱构建 列信息 基因组序列分析 基因在染色体上的定位 特定细胞中基因表达状态 基因组中基因的结构和 表达基因的功能等。 组织形式等。 基因工程原理与技术 张金文 主讲 6 二、基因组文库 （一）大小及其标准 大小及其标准 1976年L. Clark 和J. Carbon提出了一个完全的基因文库所需 克隆的计算公式： N＝ln ( 1 – p ) /