分子生物学（杨建雄）7.RNA的生物合成.pptVIP

⑤ TFIIE TFIIE由34kD亚基和57 kD亚基组成，其功能包括与RNA pol II结合，招募TFIIH。调节TFIIH的解链酶、ATP酶和激酶活性，参与启动子的解链。 ⑥ TFIIH TFIIH有9个亚基，具有解链酶，ATP酶和蛋白激酶活性，它的1个亚基是细胞周期素H(cyclin H)。其功能包括与TFIIE紧密结合和相互调节，其中2个最大的亚基(XPB和XPD)所具有的解旋酶活性，促进转录过程中DNA模板的解链。TFIIH还参与第一个磷酸二酯键的形成，其激酶活性导致RNA pol II的CTD磷酸化，从而促进启动子的清空。TFIIH解链酶活性还参与核苷酸切除修复，其突变可导致着色性干皮病。 ⑦ 延伸因子 RNA pol II的延伸因子包括P-TEFb, hSPT5, TFIIS和TAT-SF1， P-TEFb是一种激酶，可被转录激活因子募集到聚合酶上，使CTD重复序列位置2的丝氨酸磷酸化，进而促使转录由起始阶段进入延伸阶段。P-TEFb还可募集TAT-SF1，通过磷酸化激活hSPT5。TFIIS由约300个氨基酸组成，可以促进延伸和进行转录校对。与原核生物类似，真核生物在转录延伸过程中，RNA pol II有可能遇到一些特殊的碱基序列，导致RNA pol II后退，致使转录物的3-端突出，进而使转录被阻滞。阻滞的解除需要TFIIS的参与，TFIIS含有两个保守的结构域，中央结构域参与同RNA pol II的结合，C-端结构域促使RNA pol II从3-端剪切几个核苷酸。X-射线衍射研究表明，TFIIS有一个锌指结构(见第2章)，使一个突出的β发夹结构正好与RNA pol II的活性中心互补，从而激活RNA pol II内在的RNA剪切活性。此活性不仅可以解除转录的阻滞状态，而且也可能被用来切除错误掺入的核苷酸，即可用来进行转录校对，这一功能与原核生物的Gre因子相似。 ⑧ 中介因子 中介因子(mediator)是在纯化RNA pol II时得到的与CTD结合的复合物，约由20个亚基组成。它们在体外能够促进基础转录水平提高5倍～10倍，加速 CTD依赖于TF II H的磷酸化反应达30倍～50倍。酵母和人的中介蛋白均有20个以上亚基，其中7种有序列同源性，但由于研究方法不同，而被冠以不同的名称，各个亚基的功能几乎都未被确定。中介因子参与了转录激活因子与前起始复合物的相互作用，可以通过调节TFIIH的激酶活性来促进转录的起始，还可以破坏核小体的结构，促进染色质的重塑。此外，RNA pol II的转录还需要染色质重塑因子和组蛋白乙酰化酶(Histone acetylases, HAT) 参与(图7-13b) 。 表7-2概要总结了RNA pol II主要转录因子的亚基组成和功能。 表7-2 RNA pol II的通用转录因子 激活RNA pol II的剪切活性，参与转录的校对。 1 TFIIS 具有ATP酶、解链酶和CTD激酶活性，促进启动子解链和清空。 9 TFIIH 协助招募TFIIH，促进启动子的解链。 2 TFIIE 与RNA pol II结合，稳定聚合酶与DNA的结合，确定模板链。 2 TFIIF 招募RNA pol II，确定转录起点。 1 TFIIB 稳定TBP与启动子的结合 3 TFIIA 与TATA盒结合， 有调节功能。 1TBP 11TAFs TFIID 功能 亚基数目 转录因子 如图7-14所示，在形成PIC时，转录因子及RNA pol II与启动子结合的次序可能是：TFIID→TFIIA→TFIIB→(TFIIF + RNA pol II) →TFIIE→TFIIH。 （2）RNA聚合酶II转录的过程 ① 转录的起始 首先是TF II D识别TATA盒并与它结合，随后，TFIIA与TAFs结合，解除TAFs对TBP的抑制，使复盖区由–37～–17扩展为–42～–17。接着，TFIIB松散地结合在TATA盒下游–10～+10区域，并与附近的TBP结合，为RNA pol II的结合提供一个表面，并对模板链有保护作用。同时，也为下一步TFIID与TFIIF-pol II的结合提供接头。 TFIIF的小亚基与核心酶紧密结合，形成TFIIF-RNA pol II复合物，大亚基以其解旋酶催化DNA解链。此时TBP和TAFs与RNA pol II的CTD相互作用，同时还与TFIIB相互作用。 TFIIE和TFIIH 与起始反应无关，但可促使pol II从启动子开始移动，即从起始阶段进入延伸阶段。TFIIE的结合使DNA被保护区段向下游延伸至+30，随后TFIIH