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◆取供体细胞传代培养10代以内的细胞.为什么? ◆用的是去核的减数第二次分裂中期细胞(MⅡ中期)为什么? ◆激活方法: ◆激活目的: ◆促融方法:电刺激 ◆胚胎移植至代孕受体内 妊娠、分娩 2.)核移植流程 供体:优质高产奶牛 受体:普通奶牛(卵母细胞的采集与培养) 1、体积大,易操作。 2、含有促使细胞核表达全能性的物质和营养条件。 有人说它三个母亲,对吗? 核移植流程: 1、供体细胞的采集与培养 5、用物理或化学方法激活受体细胞,使其完成减数分裂进程。 6电刺激促融使供体核进入受体卵母细胞,构建重组胚胎。 4、将供体细胞注入去核卵母细胞 3、显微操作去除卵母细胞中的核 2、受体卵母细胞的采集与体外培养 7、胚胎移植入代孕母牛体内 8、妊娠分娩与供体遗传物质基础相同的犊牛。 4、体细胞核移植技术的应用前景 5、体细胞核移植技术存在的问题 看书P49-50页 动物细胞融合与单克隆抗体 1、定义:指用自然或人工方法使两个或多个不同的细胞融合成一个细胞的过程。 一、动物细胞融合 ◆细胞杂交:不同基因型的细胞之间的融合就是细胞杂交。 ◆杂交细胞:融合后形成的具有原来两个或多个细胞遗传信息的单核细胞成为杂交细胞。 细胞融合是正常的生命活动 两个细胞正在融合 受精作用 动物细胞融合 2、诱导融合的因素 生物法:灭活的病毒诱导融合.(利用灭活仙台病毒是动物细胞融合所特有的。 这是由于病毒的磷脂外衣与动物细胞的膜十分相似的缘故。病毒外壳上的某些糖蛋白可能还有促进细胞融合的功能。) 化学法:聚乙二醇PEG诱导融合. 物理法:电激融合 病毒颗粒黏 附细胞表面 细胞膜连接 细胞膜被 病毒颗粒穿通 细胞融合、形成杂种细胞 3、动物细胞融合技术的应用 细胞融合技术突破了有性杂交的局限,使远缘杂交成为可能。 利用杂交瘤技术,制备单克隆抗体。 人教版选修3 专题2 细胞工程 课题2 动物细胞工程 ◆动物细胞培养 ◆动物细胞融合 ◆单克隆抗体制备 ◆动物体细胞核移植技术和克隆动物 思考与回忆: 1、动物细胞全能性特点? 随着细胞分化程度的提高而逐渐受到限制,分化潜能变窄。细胞核仍具有全能性。 2、能否用植物组织培养的方法使动物细胞发育成动物个体? 不能。动物细胞和组织在体外培养的过程中,伴随一定的组织分化,不管采用什么手段和培养条件,由于细胞的运动、变化,细胞发生结构功能变异,结果长时间的培养只能使单一类型的细胞保存下来,最终成了简单的细胞培养。 3、动物的细胞培养的理论依据(原理)? 细胞增殖 动物细胞培养 动物细胞融合 单克隆抗体技术 核移植 动物细胞工程常用技术 其它动物细胞工程的基础 一、动物细胞培养的应用和概念: 1、概念:动物细胞培养就是从动物有机体中取出相关的组织,将它分散成单个细胞,然后,放在适宜的培养基中,让这些细胞生长和增殖. 2、原理:细胞增殖 定义:人们通常将动物组织消化后的初次培养称为原代培养。 胰蛋白酶处理 取出组织 胚胎或幼龄动物器官组织 剪碎 单个细胞 细胞悬液 转入培养瓶内培养 ( 贴壁生长长成单层细胞。有接触抑制现象)。 ①原代培养 3:过程 图示 原代培养 强调一:细胞贴壁过程 ■细胞贴壁:在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。 ■培养瓶或培养皿壁要求:表面光滑、无毒、易于帖附。 ■当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细胞的接触抑制。 强调二:接触抑制 定义: 当原代培养的细胞处于接触抑制后, 用胰蛋白酶处理,使细胞从瓶壁上脱离下来,然后加入新的培养液,将细胞分离稀释,并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这个过程称传代培养.(分瓶培养的过程) ② 传代培养 ▲细胞株:传代细胞一般能传到40-50代,遗传物质一般不会发生改变,叫细胞株。 强调:细胞系、细胞株(了解即可,老课本体系) ▲细胞系:传代50代以后不能再传下去,部分细胞遗传物质发生了改变,能连续传代,获得不死性,叫细胞系。 3、总结:动物细胞培养过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 配置细胞悬液 剪碎用胰蛋白酶处理 10代细胞 转入培养瓶 40-50代细胞 传代培养 无限传代 单个细胞 加培养液稀释 传代10代以内,遗传物质不改变,保持正常二倍体核型。 传代10-50代左右,增长缓慢以至于完全停止,部分细胞核型可能发生变化(遗传物质可能改变) 为什么用胰蛋白酶处理? 分瓶传代培养 原代培养特点:细胞贴壁、接触抑制 继续传代培养少部分细胞获得不死性,细胞突变,遗传物质已经改变,等同于癌细胞。 细胞株:一般说遗传物质未改变 细胞系:遗传物质已改变 原代培养 4.动物细胞培养的条件: 1
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