4GC–MS数据处理及定性定量分析.ppt

(二)定量方法 3．内标标准曲线方法 外标法存在一定缺点，限于每次的分析条件从样品处理到测试都会产生误差。为了克服不可避免的测量误差，选择适当的基准物质(内标化合物)加入标样和待测样品中进行测定，计算待测化合物和内标化合物响应值之比(称为相对响应因子)，由相对响应因子和加入内标化合物的量进行定量，称为内标法。相对响应因子计算，可由： 得到 式中 wi——待测化合物标样含量； Ai——待测化合物标样峰面积(或峰高)； WS——内标化合物含量； As——内标化合物峰面积(或峰高) (二)定量方法 当进样量、仪器响应值发生变化时，处在同一样品中的待测化合物与内标化合物的含量比值不变；它们的响应值的比值也就不变 因此，内标法可以消除由于进样量、仪器响应值波动等带来的系统误差。最好在所有标样和待测样中加入内标的量相同，以避免由于内标物的浓度变化引起响应值的非线性变化所造成的偏差 如果在样品前处理(如浓缩、萃取、衍生化等)之前加入内标，还可以补偿待测组分在前处理中的损失。必要时可以加入多个内标 内标法的关键是内标的选择。内标化合物应该是待测样品中不存在的化合物，而其性质应尽可能和待测化合物相近，溶于样品又不起化学反应，出峰接近待测化合物．(或在它们之间)又不能相互重叠，确实不易找到 (二)定量方法 4、同位素稀释法 最理想的是采用待测化合物的同位素标记物作为内标，可以保证内标化合物的化学性质、色谱行为、质谱行为都与待测化合物一致，这样可以消除化合物之间的差别带来的误差 此法又称“同位素稀释法” 同位素标记物作内标只有GC／MS联用技术可以运用，色谱其它检测器无法使用，这就是所指GC／MS联用独到之处 (二)定量方法 标准加入法 该方法实质上是一种特殊的内标法，它以欲测组分的纯物质为内标物，加入到待测样品中，然后相同的色谱条件下测定加入欲测组分前后的峰面积，从而计算欲测组分在样品中的含量的方法。 在很多情况下能较好地消除基质效应，获得较为满意的分析结果。 (二)定量方法 1997年国际物质量咨询委员会(CCQM)在巴黎召开第六次会议，将同位素稀释质谱法、精密库伦法、电位滴定法、凝固点法等作为绝对定量方法，其中同位素稀释质谱法是唯一一种微量、痕量和超痕量元素的权威测量方法 同位素化合物与样品分析物在一定的范围内应视为同一化合物(如有机质谱中常用13C和2H作为标记同位素)，二者具有基本相同的物理和化学性质，虽然天然化合物中有一定同位素化合物，但其量相对极小，基本不会对检测有不利影响 同时内标与样品分析物的流出时间很相近或相同时，由此在基质中添加一定量的、合适的同位素标准品作为内标进行方法的质量控制手段是非常适合的 (二)定量方法 式中，RF为校正因子，RF=含量/面积或含量/峰高；C为含量；S为峰面积或峰高 同位素稀释法的优点为：一般可以校正基体影响(标样和样品的差别)，提取效率稳定；进样误差小，保留时间随溶剂梯度变化影响不大；仪器漂移影响小；在质谱中同位素稀释剂与样品分析物响应稳定，定量结果从样品分析物与内标的响应比得出更准确 缺点为：样品制备很耗时；对移液和稀释等中的误差结果有缺陷 计算公式： （三）定量分析应注意的问题 1．仪器校准 为了使定量数据准确，重现性好，在采集数据时要得到很好的峰形，仪器校准非常重要 色谱条件从进样口到色谱柱、进样方式、衬管类型、进样口的清洁程度、不分流进样开启分流阀的时间、柱效的保持、选用的溶剂和相应的初始炉温等影响色谱定量结果的因素会同样影响GC／MS联用的定量 质谱条件有各参数的设置、调谐方式、调谐结果差别、仪器的稳定性、离子源、分析器清洁程度等，都直接影响定量结果。所以，定量分析首先要把仪器调整到最佳状况，并且对仪器的检测限应该有数 选择适当的仪器条件和方法往往会得到更好的定量分析结果。如某些化合物的CI电离方式比EI电离灵敏度明显要高 SIM方式比全扫描方式灵敏度高，重现性也好 （三）定量分析应注意的问题 2．定性要正确 定量分析的重要前提是定性要正确。定性鉴定要符合以下原则： ①色谱保留时间定性，若无标样定性，保留时间与重要参考文献要相符。因此色谱分离一定要好。无杂质干扰 ②质谱定性，质谱图库检索匹配率应在9 0％以上，质谱能得到合理解释 （三）定量分析应注意的问题 ③定量离子应该是待测化合物的特征离子，多数情况下选择基峰或较强的峰，这样可以减少误差。但是当不同化合物的特征离子质量相同时，尤其是未完全分离的色谱峰中两个化合物欲选的离子质量相同时，应选择其它不同质量的离子作为定量离子。一般在所有化合物谱图中出现概率很高的离子(m／2 43)，或在本底及样品基质中出现概率高的离子，强度虽高，除非不得已，也不选择它们作