可见—紫外分光光度法测定浓度.doc

一．目的(Objective) 1．初步熟悉可见-紫外分光光度仪的使用方法。 2．熟悉测绘吸收曲线的方法。 3．学会利用可见-紫外分光光度仪进行未知物的浓度分析。 二、基本原理(Principle) 亚甲基蓝溶液在665nm下有最大光度吸收值，利用此性质绘制亚甲基蓝的吸收曲线，并测定未知亚甲基蓝溶液的浓度。 三、仪器与试剂(Equipment and Reagents) 1．仪器：上海棱光技术有限公司 Spectrumlab 22 pc 紫外可见分光光度计，1cm石英吸收池。 2．试剂：亚甲基蓝溶液(25ppm)、亚甲基蓝溶液(未知浓度) 四．实验步骤(Procedure) 1．打开样品室的仓盖（预热20min），调节好测定波长。 2．利用亚甲基蓝标准液(25ppm)配制亚甲基蓝溶液(1ppm)、亚甲基蓝标准液(2ppm) 亚甲基蓝标准液(3ppm)、亚甲基蓝标准液(4ppm)、亚甲基蓝标准液(5ppm)。 3．关上样品室仓盖，按0键归零再打开样品室仓盖，按100%键至显示器显示100. 4．将空白比色皿放入样品池一号位，再依次放入装有不同浓度亚甲基蓝溶液的比色皿，盖好样品室仓盖进行测量，先测出亚甲基蓝标准液的吸光度，再测出亚甲基蓝未知液的吸光度。 5．绘制出亚甲基蓝标准液的吸光度——浓度吸收曲线，再利用吸光度——浓度吸收曲线与测得的测出亚甲基蓝未知液的吸光度算出亚甲基蓝未知液的浓度度。暨南大学本科实验报告专用纸(附页) 暨南大学本科实验报告专用纸(附页) 含有杂原子的有机溶剂，通常均具有很强的末端吸收。因此，当作溶剂使用时，它们的使用范围均不能小于截止使用波长。测定时，除另有规定外，应以配制供试品溶液的同批溶剂为空白对照，采用1cm的石英吸收池，在规定的吸收峰波长±2nm 以内测试几个点的吸光度，或由仪器在规定波长附近自动扫描测定，以核对供试品的吸收峰波长位置是否正确。当吸光度和浓度关系不呈良好线性时，应取数份梯度量的对照品溶液，用溶剂补充至同一体积，显色后测定各份溶液的吸光度，然后以吸光度与相应的浓度绘制标准曲线，再根据供试品的吸光度在标准曲线上查得其相应的浓度，并求出其含量。由于环境因素对机械部分的影响，仪器的波长经常会略有变动，因此除应定期对所用的仪器进行全面校正检定外，还应于测定前校正测定波长。