2015版无菌检查法.pptx

2015版 无菌检查法 姜珊 2014.10.07 无菌检查法 无菌检查法系用于检查药典要求无菌的药品、生物制品、医疗器具、原料、辅料及其他品种是否无菌的一种方法。若供试品符合无菌检查法的规定,仅表明了供试品在该检验条件下未发现微生物污染 环境洁净度 2010版 无菌检查应在环境洁净度 10 000级下的局部洁净度 100级的单向流空气区域内或隔离系统中进行 2015版 无菌检查应在无菌条件下进行，试验环境必须达到无菌检查的要求，检验全过程应严格遵守无菌操作，防止微生物污染，防止污染的措施不得影响供试品中微生物的检出。 培养基 硫乙醇酸盐流体培养基主要用于厌氧菌的培养，也可用于需氧菌培养； 胰酪大豆胨液体培养基用于真菌和需氧菌的培养。 制备好的培养基应保存在 2～25℃、避光的环境，若保存于非密闭容器中，一般在 3周内使用； 若保存于密闭容器中，一般可在一年内使用。 培养基PH区别 2010版 2015版 改良马丁培养基 调节 pH 值使灭菌后为 6.4 ± 0.2  胰酪大豆胨液体培养基 调节 pH 使灭菌后pH值为 7.3±0.2 营养肉汤培养基 调节 pH 值使灭菌后为 7.2 ± 0.2  胰酪大豆胨琼脂培养基 调节 pH使灭菌后在 25℃的pH 值为 7.3±0.2  营养琼脂培养基 调节pH 值使灭菌后为 7.2±0.2 沙氏葡萄糖液体培养基 调节 pH使灭菌后在 25℃的pH 值为 5.6±0.2 改良马丁琼脂培养基 调节 pH值使灭菌后为 6.4±0.2 沙氏葡萄糖琼脂培养基 调节 pH使灭菌后在25℃的pH值为5.6±0.2 培养基的适用性检查 无菌检查用的硫乙醇酸盐流体培养基和胰酪大豆胨液体培养基等应符合培养基的无菌性检查及灵敏度检查的要求。本检查可在供试品的无菌检查前或与供试品的无菌检查同时进行。 无菌性检查 每批培养基随机取不少于 5 支（瓶），置各培养基规定的温度培养 14天，应无菌生长。 培养基的适用性检查 灵敏度检查 菌液制备 接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中，30～35℃培养 18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培 养基上，20～25℃培养 24～48 小时，上述培养物用 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白 胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含菌数小于 100cfu（菌落形成单位）的菌悬液。接种黑曲霉的新鲜培养 物至沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基上， 20～25℃培养 5～7 天，加入 3～5ml 含 0.05％（v/v）聚山梨酯 80 的 pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。然后，采用适宜的方法吸出孢子悬液至无菌试管内，用含 0.05％（v/v）聚山梨酯 80的 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液制成每 1ml 含孢子数小于 100cfu 的孢子悬液。 培养基适用性检查直观区别 2010版 2015版 相应菌种接种所用培养基 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 枯草芽孢杆菌 营养肉汤培养基中或营养琼脂培养基 胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基 白色念珠菌 改良马丁培养基中或改良马丁琼脂培养基 沙氏葡萄糖液体培养基中或沙氏葡萄糖琼脂培养基 黑曲霉 改良马丁琼脂斜面培养基 沙氏葡萄糖琼脂斜面培养基 霉菌、酵母菌培养温度 23～28℃ 20～25℃ 稀释液 0.9%无菌氯化钠溶液 pH7.0 无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液或 0.9%无菌氯化钠溶液 培养基的适用性检查 培养基接种 取每管装量为 12ml 的硫乙醇酸盐流体培养基 7 支，分别接种小于 100cfu 的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌各 2支，另 1支不接种作为空白对照，培养 3 天；取每管装量为 9ml 的胰酪大豆胨液体培养基 7支,分别接种小于 100cfu的枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉各 2支，另 1支不接种作为空白对照，培养 5天。逐日观察结果。 培养基接种直观区别 2010版 2015版 硫乙醇酸盐流体培养基 9支 金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌 硫乙醇酸盐流体培养基 7支 金黄色葡萄球菌、 铜绿假单胞菌、 生孢梭菌 改良马丁培养基 5支 白色念珠菌、 黑曲霉 胰酪大豆胨液体培养基 7支 枯草芽孢杆菌、 白色念珠菌、黑曲霉 方法适用性试验 菌种及菌液制备 除大肠埃希菌（Escherichia coli）[CMCC(B) 44102〕外，金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、生孢梭菌、白色念珠菌、黑曲霉同培 养基灵敏度检查。大肠埃希菌的菌