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全封闭式程序控制自动组织脱水机 使用体会 首都医科大学附属复兴医院 陈伟东 组织处理 组织固定 组织脱水 去除组织中的水分和固定剂。 组织透明 除去脱水剂，使介质浸润组织成分。 组织浸蜡 使承托介质渗透组织 组织固定 固定是通过添加剂让组织中所有细胞及细胞外成份迅 速死亡，以避免细胞中溶酶体成分的破坏作用，保持离体 组织细胞与生活时的形态相似，并防止细菌繁殖所致的腐 烂，保存蛋白质与核酸的基本结构。 常用的组织固定液10%中性福尔马林。 甲醛：甲醛水溶液渗透力强，固定均匀，对组织收缩 较少，能保存脂类和类脂体，对脂肪，神经及髓鞘的固定 效果很好，但不能保存组织内的尿酸盐类结晶。 10% 中性福尔马林缓冲固定液可以很好的保存细胞核 的形态结构，同时也能够较好的保存细胞内大多数抗原 性，特别是对免疫组化、原位杂交、FISH、DNA分析、 PCR等染色效果优于普通10%福尔马林及其他各种混合固 定液，同时也可避免福尔马林色素的形成，是一种最理想 的常规固定液。 组织脱水的目的和原则 组织经固定后，含有大量水分。组织在透明浸蜡前必 须进行脱水，就是用某些溶剂将组织内的水分组建置换出 来，以利于透明剂和石蜡的渗入，这个过程称为脱水。 1. 组织脱水原则之一 将组织内水分脱干净但又不使组织过脱水。 2. 组织脱水原则之二 脱水剂自低浓度至高浓度进行。 3. 外检及尸检、实验动物中的脑组织、淋巴结，有条件时应单独设置脱 水程序。 4. 穿刺小标本最好不要与大组织同时进行脱水，应单独设置脱水程序。 5. 脱水时间根据脱水剂的功能及脱水剂的新旧程度确定。 乙醇：最常用的脱水剂。它具有亲水性，能溶于水和其它有机溶 剂，脱水力强，能使组织硬化，并能与媒浸剂二甲苯较好的融合，但 容易使组织收缩、变脆。 脱水应缓慢的进行，如果组织内外液体的浓度梯度过大，会增加 细胞变形的可能性。使用乙醇进行组织脱水通常是由低浓度向高浓度 的梯度进行。全自动密闭式组织处理机常用的脱水顺序： 75%→95% Ⅰ→95% Ⅱ→100% Ⅰ→100% Ⅱ→100% Ⅲ。 组织透明 组织脱水后，必须经过一种即能与乙醇相结合，又能 溶解石蜡的溶剂，通过这种溶剂的媒介作用石蜡浸入组织。 这种溶剂使组织呈现出不同程度的透明状态，这个过程成 为透明。 透明这个环节要根据组织块的大小厚薄、液体的新旧 和温度来决定透明的时间。 二甲苯是最常用的透明剂，使用不当易使组织收缩变 脆，二甲苯透明的时间必须控制在1.5小时以内。 组织浸蜡 组织经过脱水透明后用石蜡、火棉胶、明胶等支 持剂浸入组织内，使组织变硬并将组织包裹在内，有 利于切片，这个过程称为浸蜡。 浸蜡的目的是置换组织中的透明剂，代之石蜡渗 入组织内部，把软组织变为硬度合适的蜡块，以便切 成薄片。 浸蜡的时间要根据组织的类型、大小和温度而定。 浸蜡用的石蜡一般用低温蜡，熔点为54-56°C 。浸蜡 时间可每步50-60分钟，3-4步即可。 全自动脱水机是一种真空密闭组织处理装置。 在组织处理过程中组织始终在一个缸里，试剂和石蜡 不断地从缸里移进和移出，每一步都可专门设定时间、温 度、真空以及压力。 这个系统的优点是真空和热度适用于每一个阶段,有专 门设定的组织处理程序、液体泄露保护和烟雾清除系统， 并且处理装置运用报警系统和诊断程序来警醒仪器的故障 检查。 我科使用的全自动脱水机 Shandon Excelsior 脱水机 樱花VIP6脱水机 全自动密闭式脱水机的结构 控制面板 处理槽 试剂柜：固定液瓶、脱水试剂瓶、蜡缸、废蜡缸、冲洗瓶、 储备缸、更换试剂瓶。 散装试剂系统 全自动密闭式脱水机的试剂缸配置 Shandon Excelsior 福尔马林、酒精、二甲苯、石蜡缸数 按比例为2 ：6 ：3 ：3配置。 樱花VIP6 福尔马林、酒精、二甲苯、石蜡缸数按比例为 1