动物性食品中致病微生物和寄生虫的检验检疫要点.ppt

（5）查病畜胴体。镜检发现阳性时，按圆盘转数（0、1、2、3……顺序）乘以100（每组头数×圆盘孔数）加孔号乘以10（每组头数），即得出该组10头猪的胴体编号。计算公式：圆盘转数×100+孔号×10。例如：阳性组圆盘转数是20，孔号数为3，代入公式为20×100+3×10=2030，该组胴体编号即为2021、2022、2023……2030这10个号码。将该10头猪的胴体全部推入修割轨道待查。复查按每2头为一组消化镜检，检出阳性组，再逐头检测，确定病畜胴体。复查时用压片镜检法更快、更方便。 （三）旋毛虫酶联免疫吸附试验（ELISA） 1．实验原理。ELISA是利用酶作为抗原或抗体的标记物，在固相载体上进行抗原或抗体的测定。ELISA的原理是：让抗原或抗体结合到固相载体表面，并保持其免疫活性；使抗原或抗体与某种酶联结成酶标抗原或抗体，仍保留其免疫活性和酶的催化活性。在测定时，把受检标本和酶标抗原或抗体，按不同步骤与固相载体表面的抗原或抗体起反应，形成抗原-抗体复合物。经清洗后在固相载体表面留下不同量的酶。加入酶反应的底物后，底物在复合物上酶的催化作用下生成有色产物，产物的量与标本中受检抗原或抗体的量直接相关。故可根据颜色反应的深浅，间接推断受检抗原或抗体的存在及其含量，达到定性或定量检测的目的。 2．实验方法、步骤和操作要领。 （1）采样。用1.0×3.0cm滤纸片紧贴胴体残留血液处或血凝块（若无残血，可将滤纸片紧贴肌肉组织新鲜断面，轻轻挤压断面两侧），当滤纸片全部湿润后，将其放入小玻璃瓶（装有含吐温20的pH7.4 PBS液1ml）中，振摇后即为被检样品。纯肌肉时，可取蚕豆大肌肉置于小玻璃瓶中，剪碎，加2-3倍PBS液，振摇、静置，上清即为被检样品。 （2）抗原包被。将旋毛虫抗原用包被液稀释成一定浓度（抗原蛋白含量2mg/ml），加入反应板A、B、C、D列1-10号孔内，每孔加0.2m1；E列各孔分别为阴、阳性血清对照，每孔加0.2ml。每列的第11孔为空白对照（每孔加稀释液0.2ml），加毕，将反应板加盖，置湿盒内，37℃孵育2h或4℃过夜，使其达到最大反应强度。 （3）洗涤。将反应板倒空，伏置于滤纸上片刻，用洗涤液加满各孔，室温下静置后倒空，并用滤纸吸干。再加满洗液，如此重复3次。 （4）加入被检样品。将被检样品加入预定孔内，每份加两孔，每孔加0.2m1，包被液空白对照各孔加洗涤液0.2ml。同时作阴、阳性标准血清对照，37℃孵育2h。 （5）洗涤3次，方法同上。 （6）加酶标抗体。按照说明，用洗液稀释至最适浓度，每孔加0.2ml，37℃孵育2h（适当提高反应温度及抗原、酶结合物浓度，可缩短孵育时间）。 （7）洗涤3次，方法同上。 （8）加底物。将新鲜配制的底物溶液加入各孔，每孔0.2ml，37℃湿盒避光作用15min。 （9）终止反应。每孔加终止液50μl，静置5min。 （10）测定OD值。在酶标测定仪上，于492nm波长，按仪器使用及制定标准要求调节仪器，测定各反应孔的OD值，记录结果。 （11）结果判定。①根据反应颜色的深浅先用肉眼判定。参考阳性及阴性对照，分别判为阳性（＋）、阴性（－）及可疑（±）。②凡被检样品的OD值高于标准阴性血清平均OD值2倍以上，即判阳性反应。 （四）旋毛虫病阳性肉的处理 如果发现旋毛虫，应根据号码查对肉尸、内脏和头等按照农业部、卫生部、外贸部、商业部联合颁布的《肉品卫生检验试行规程》统一进行处理。 1．宰后检验在24个肉片标本内，发现包囊或钙化的旋毛虫不超过5个者，横纹肌和心脏高温处理后出场。超过5个以上者，横纹肌和心脏作工业用或销毁。 2．上述两种情况的皮下及肌肉间脂肪可炼食用油，体腔内脂肪不受限制出场。 3．肠可供制肠衣，其它内脏不受限制出场。 学习形式：讨论/中期作业 植物性食品中病虫害和致病微生物主要检验检疫对象有哪些? 植物性食品中病虫害和致病微生物检验检疫技术有哪些?发展趋势是什么? 国内外植物性食品中病虫害和致病微生物流行现状如何?怎样有效控制? * ?灭活： ·经过56℃，30分钟、60℃，10分钟处理均 会丧失活性；加热到65℃～70℃时只要2 分钟即失活 ·对紫外线敏感，用紫外线直接照射病毒可 以依次破坏其感染力、血凝素活性和神经 氨酸酶活性 ·在阳光直射下流感病毒40～48小时即失活 三、流感病毒 四、流行病学(禽、人禽流感) ?传播途径： ·飞沫经呼吸道传播（与SARS冠状病毒育别） ·接触传播：经口，黏膜，破损皮肤 ·经口传播：污物—口，粪—口 (1)病毒分离 ·采用级鸡胚或敏感细胞系(如Vero、MDCK) ·通常采用鼻咽拭子、含漱液、气管/肺胞灌洗液等 ·病毒分离后需经核酸检测和/或血清检测证实 ·病毒分离后可通过基因测序以确定所分