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多糖的分子量和分子量分布测定标准操作规程
多糖的分子量与分子量分布测定标准操作规程
目的：
建立多糖的分子量与分子量分布测定的标准操作规程。
2. 依据：
《中华人民共和国药典》2000年版二部。
3. 范围：
适用于药品中多糖的分子量与分子量分布的测定。
4. 职责：
QC检验员对本标准的实施负责。
5. 程序：
5.1. 对仪器的一般要求：
色谱柱为测多糖专用凝胶柱（按所测样品的分子量大小选择特定排阻范围的凝胶
柱）。检测器为示差折光检测器。
5.2. 系统适用性试验：
按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，规定分析状态下色谱柱的最小理论板数
（n）和供试品在该分析状态下的分配系数（Kd）应达到规定的要求。
Kd = tR—t0 tT—t0 式中 tR为供试品峰的保留时间；
t0为完全被填料颗粒网孔排阻的大分子的保留时间，一般指蓝色葡聚糖的保
留时间。
tT为能自由进出填料颗粒网孔的小分子的保留时间，一般指葡萄糖的保留时间。
5.3. 测定法：
5.3.1. 系统校正：根据供试品分子量大小，一般选用5个已知分子量的多糖标准品
（常用的为葡聚糖）分别用流动相制成每1ml中约含10mg的标准溶液，分别取上述标准溶液25μl，注入液相色谱仪，记录色谱图。由GPC专用软件绘制标准曲线，得线性回归方程：
1gMW=a+btR
式中 MW为标样的已知重均分子量；
tR 为标样的保留时间。
5.3.2. 样品测量：取供试品溶液25μl注入液相色谱仪，记录色谱图，按下式计算
分子量：
Mn=ΣRIi/Σ（RIi/Mi）
Mw=Σ（RIiMi）/ΣRIi
D =Mw/Mn
式中 Mn为数均分子量；
RIi为为样品i级分的物质量，即供试品在保留时间i的峰高；
Mi为样品i级分的分子量，即供试品在保留时间i的分子量。
5.4. 结果处理：
采用GPC专用软件，可获得供试品归一化色谱图，微分、积分分子量分布图，各
时间点的分子量（片段数据）和各种平均分子量。根据供试品需要选择各项测定结果。
仪器使用记录
XXXXXXXX 编号：ZL0092 00
日 期 检 验 内 容 使用时间 仪 器 状 态 使用人
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