温度对β-甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响.pdf

第42卷第4期 当 代 化 工 Vo1．42．NO．4 2013年 4月 ContemporaryChemicalIndustry Apri]，2013 温度对 一甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响 周洪波L，林福来 ，郑 甲 ，郭 宁 ，吴俊子 ，吴丽双 ，邱冠周L (1．中南大学 资源加工与生物工程学院， 湖南 长沙 410083； 2．生物冶金教育部重点实验室 ， 湖南 长沙 410083) 摘 要：B一甘露聚糖酶已经广泛的在毕赤酵母中异源表达 ，为了提高p一甘露聚糖酶在毕赤酵母中的产量 ， 本文研究了培养温度对 p一甘露聚糖酶在毕赤酵母中表达的影响。通过比较不同温度下p一甘露聚糖酶在转录和 蛋白表达水平的差异，发现降低温度虽然降低了mRNA表达量，但是外源蛋白得到积累增加 ；降低培养温度可 以显著提高重组菌株的活性，从而减少细胞死亡带来的胞内蛋白酶的释放，最终使得低温下发酵液中的蛋白酶 活力显著下降。研究结果表明降低培养温度能显著提高B一甘露聚糖酶在毕赤酵母中的表达量。 关 键 词：B一甘露聚糖酶；qPCR；mRNA表达；培养温度 中图分类号：TQ925 文献标识码：A 文章编号： 1671-0460(2013)04—0401—05 EffectofCultureTemoeratureonthe Expressionof[I-mannanaseinpichiapastoris ZHOUHong-Bo ，LINFu—laiL， ZHENGJia1， GUONing ， WUJun·Zf，WULi—shuang ， UGuan-zhou (1．CentralSouthUniversity,HunanChangsha410083，China； 2．KeylaboratoryofBiometallurgyofMinistryofEducation，HunanChangsha410083，China) Abstract：p—MannanasehasbeenextensivelyexpressedheterologouslyinPichiapastoris．Theeffectoftheculture temperautreontheexpressionof~-mannanaseinPichiapastoriswasinvestigatedinordertoimprovetheproduction of~-mannanaseinPichiapastoris．Throughcomparingthedifferenceoftranscriptionandproteinexpressionlevelsof ~-mannanaseunderdifferentculturetemperature，it’SfoundthatmRNA leveldecreasedwithdecreasingofthe temperautre，butexogenousproteinwasaccumulated．Loweringculturetemperaturecouldevidentlyimprovethecell aviability oftherecombinantstrain，whichcouldreducethereleaseofintracellularproteasefrom thedeath cell， ultimately make theproteaseactivity in thefermentation broth decrease significantly underthelow temperature cultivatecondition．Theresearchresultsshow th