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反相高效液相色谱法有效分离和同时测定人体尿液中 7种喹诺酮1 孙汉文*，刘广宇，乔凤霞 河北大学化学与环境科学学院河北省分析科学技术重点实验室，河北保定（071002 ） E-mail ：hanwen@ 摘 要：建立了一种反相高效液相色谱同时检测人体尿液中吡哌酸与6种氟喹诺酮类药物的 方法。以3.00 ml 10%三氯乙酸预处理 1.00 ml尿液 以脱蛋白。使用ZY1104型 C18 色谱柱 （250mm×4.6mm,5µm ）, 采用乙腈–0.02 mol/L 四丁基溴化铵–三氟乙酸缓冲液为流动相（体 积比为9:91, pH 2.87 ）。7种药物的校准曲线在0.5 ～100 µg/ml浓度范围内呈良好的线性，相关 系数r≥0.9996 ，检出限为0.036 ～0.088 µg/ml ，样品的平均加标回收率在91.6% ～99.5%之间， RSD ＜7% （n=5 ）。 关键词：反相高效液相色谱法；吡哌酸；氟喹诺酮；人体尿液 喹诺酮类药物是一类体系庞大的抗生素类药物，这些化合物广泛应用于人药和兽药领 域，被用来治疗肺部﹑尿路和消化道感染。药物代谢动力学研究表明，喹诺酮类药物主要是 通过肾脏消除,而以较高的浓度随尿排出[1] 。过度的使用这类抗生素药物会增强病原体的耐药 性，药物残留可能直接导致中毒或者抵抗人体的病原体，还有可能导致过敏反应[2] 。关于单 服依诺沙星、氟罗沙星、环丙沙星后，其随尿液排出情况已有报道[3-5] 。高效液相色谱法已 [6] [7] [8] 用于尿液中诺氟沙星 、氧氟沙星 和环丙沙星及其代谢物M1 的分离测定 。由于氟喹诺酮 类药物结构上的相似性,多限于单组分的测定或多组分梯度洗脱分离，采用同一流动相同时 测定尿液中多种氟喹诺酮类药物少见报道。为进行药代动力学研究和尿药浓度检测，以指导 临床合理用药，我们建立了一种有效分离和同时检测尿液中吡哌酸、依诺沙星﹑氟罗沙星﹑ 培氟沙星﹑洛美沙星﹑环丙沙星﹑恩诺沙星等7种喹诺酮类药物的反相高效液相色谱法。 1 实验部分 1.1 主要仪器和试剂 1.1.1 仪器 日本岛津LC-10Avp高效液相色谱仪,SPD-M10Avp检测器,Class-vp工作站，SCL-10Avp 控制器，DGU-12A在线脱气装置和CTO-10Avp柱温箱。PHS-3C型精密pH计（上海雷磁仪器 厂）；KQ-3200B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；低速离心机（北京医用离 心机厂）；XGJ-30型高纯水机（北京永成水净化技术有限公司）。 1.1.2 试剂 吡哌酸（Pipemidic acid ）﹑依诺沙星(Enoxacin) ﹑氟罗沙星(Fleroxacin) ﹑培氟沙星 (Pefloxacin) ﹑洛美沙星(Lomefloxacin) ﹑环丙沙星(Ciprofloxacin)和恩诺沙星(Enrofloxacin) ( 中国药品生物制品检定所),分别用0.01mol/L HCL配成 2mg/ml 的标准储备液以及浓度为 200µg/ml 的混合标准溶液。乙腈为色谱纯；四丁基溴化铵，三氯乙酸均为分析纯；三氟乙 酸为化学纯；水为高纯水。10%三氯乙酸溶液：称量10.0000g三氯乙酸固体于100 ml容量瓶 1本课题得到教育部博士点基金（项目名称：导数-化学发光分析新技术与喹诺酮类兽药残留分析方法，项目 编号：20050075003 ）的资助。 - 1 - 中，加水定容。0.02 mol/L 四丁基溴化铵–三氟乙酸缓冲液：称取四丁基溴化铵固体6.4474g， 加水溶解稀释至1000ml，以三氟乙酸调其pH值为2.87 。 1.2 色谱条件 色谱柱：ZY1104型 C18色谱柱(250mm×4.6mm,5µm) （北京分析仪器厂）；流动相：乙 腈–0.02 mol/L 四丁基溴化铵（体积比为 9:91 ）