液相色谱基本概念和术语.doc

Ⅱ 基本概念和理论 一、基本概念和术语 1.色谱图和峰参数 ⊕色谱图（chromatogram）--样品流经色谱柱和检测器，所得到的信号－时间曲线，又称色谱流出曲线（elution profile）. ⊕基线（base line）--流动相冲洗，柱与流动相达到平衡后，检测器测出一段时间的流出曲线。一般应平行于时间轴。 ⊕噪音（noise）――基线信号的波动。通常因电源接触不良或瞬时过载、检测器不稳定、流动相含有气泡或色谱柱被污染所致。 ⊕漂移（drift）基线随时间的缓缓变化。主要由于操作条件如电压、温度、流动相及流量的不稳定所引起，柱内的污染物或固定相不断被洗脱下来也会产生漂移。 ⊕色谱峰（peak）--组分流经检测器时相应的连续信号产生的曲线。流出曲线上的突起部分。正常色谱峰近似于对称性正态分布曲线（高斯Gauss曲线）。不对称色谱峰有两种：前延峰（leading peak）和脱尾峰（tailing peak ）。 ⊕拖尾因子（tailing factor,T）T=B/A,用以衡量色谱峰的对称性。也称为对称因子（symmetry factor）或不对称因子（asymmetry factor）《中国药典》规定T应为0.95～1.05。T0.95为前延峰，T1.05为拖尾峰。 ⊕峰底――基线上峰的起点至终点的距离。 ⊕峰高（Peak height,h）――峰的最高点至峰底的距离。 ⊕标准偏差（standard deviation, σ）--正态分布曲线x=±1时（拐点）的峰宽之半。正常峰宽的拐点在峰高的0.607倍处。 ⊕峰宽（peak width,W）--峰两侧拐点处所作两条切线与基线的两个交点间的距离。W=4σ。 ⊕半峰宽（peak width at half-height,Wh/2）--峰高一半处的峰宽。W h/2＝2.355σ。 ⊕峰面积（peak area,A）――峰与峰底所包围的面积。A=2.507σh=1.064Wh/2h 2.定性参数（保留值） ⊕死时间（dead time,t0）--不保留组分的保留时间。即流动相（溶剂）通过色谱柱的时间。在反相HPLC中可用苯磺酸钠来测定死时间。 ⊕死体积（dead volume,V0）――由进样器进样口到检测器流动池未被固定相所占据的空间。它包括4部分：进样器至色谱柱管路体积、柱内固定相颗粒间隙（被流动相占据，Vm）、柱出口管路体积、检测器流动池体积。其中只有Vm参与色谱平衡过程，其他3部粉只起峰扩展作用。为防止峰扩展，这3部分体积应尽量减小。V0＝F×t0（F为流速） ⊕保留时间（retention time,tR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值的时间。 ⊕保留体积（retention volume,VR）--从进样开始到某个组分在柱后出现浓度极大值时流出溶剂的体积。又称洗脱体积。VR＝F*tR . ⊕调整保留时间（adjusted retention time,tR’）--扣除死时间后的保留时间。也称折合保留时间（reduced retention time）。在实验条件（温度、固定相等）一定时，tR’只决定于组分的性质，因此，tR’(或tR)可用于定性。TR’=tR-t0 ⊕调整保留体积（adjusted retention volume,VR’）--扣除死体积后的保留体积。VR’=VR-V0 或VR’=F*tR’ 3.柱效参数 ⊕理论塔板数（theoretical plate number,N）用于定量表示色谱柱的分离效率（简称柱效）。 N=（tR/σ）2=16(tR/W)2 =5.54(tR/W1/2)2 ⊕理论塔板高度（theortical plate height,H）每单位柱长的方差。实际应用时往往用柱长L和理论塔板数计算：H=L/N 4.相平衡参数 ⊕容量因子（capacity factor,K）--化合物在两相间达到平衡时，在固定相与流动相中的量之比。 K＝（tR-t0）/t0=tR’/t0（或溶质在固定相中的量/溶质在流动相中的量）,因此，容量因子也称质量分配系数。 ⊕选择性因子（selectivity factor,α）--相邻两组份的分配系数或容量因子之比。 α＝k2/k1（设k2k1），α又称为相对保留时间（《美国药典》）。要使两组分得到分离，必须使α≠1。α与化合物在固定相和流动相中的分配性质、柱温有关，与柱尺寸、流速、填充情况无关。 5.分离参数 ⊕分离度（resolution,R）--相邻两峰的保留时间之差与平均峰宽的比值。也叫分辨率，表示相邻两峰的分离程度。 R=（tR2-tR1）/[(W1+W2)/2]。, 当W1=W2，R=1时,称为4σ分离，两峰基本分离，裸露锋面积为95.4％，内测峰基重叠约2％。 当R=