1第六章微生物的生长和控制〔第一节测定生长繁殖的方法〕.pptVIP

一个菌落可能是多个细胞一起形成，所以在科研中 一般用 菌落形成单位（colony forming units， CFU）来表示， 而不是直接表示为细胞数。 根据每皿上形成的CFU数乘上稀释度可推算出菌样的含菌数。此方法最为常用，但操作较繁琐且要求操作者技术熟练——缺点。 国外出现了微型、快速、商品化的用于菌落计数的小型纸片或密封琼脂板。原理是利用加在培养基中的活菌指示剂TTC（2，3，5－氯化三苯基四氮唑），它可使菌落在很微小是就染成易于辨认的玫瑰色。 2. 膜过滤培养菌落计数法 当样品中菌数很低时，可以将一定体积的湖水、海水或饮用水等样品通过膜过滤器，然后将将膜转到相应的培养基上进行培养，对形成的菌落进行统计。 3. 厌氧菌的菌落计数法 一般可用亨盖特滚管培养法进行。此法设备较复杂，技术难度很高。 简便快速的半固体深层琼脂法，可测定双歧杆菌（bifidobacteria）和乳酸菌（lactic acid bacteria）等厌氧菌活菌数。 原理： 试管中的深层半固体琼脂有良好的厌氧性能，并利用其凝固前可作稀释用，凝固后又可代替琼脂平板作菌落计数用的良好性能。 兼有省工、省料、省设备和菌落易辩认等优点！ 第七章 微生物的生长及其控制 生长和繁殖是保证 微生物获得巨大数量的必要前提。 生物个体物质有规律地、不可逆增加，导致个体体积扩大的生物学过程。 生长（growth）： 生物个体生长到一定阶段，通过特定方式产生新的生命个体，即引起生命个体数量增加的生物学过程。 繁殖（reproduction）： 生长是一个逐步发生的量变过程， 繁殖是一个产生新的生命个体的质变过程。 在高等生物里这两个过程可以明显分开， 但在低等特别是在单细胞的生物里，由于细胞小， 这两个过程是紧密联系又很难划分的过程。 生长和繁殖 群体生长 = 个体生长 + 个体繁殖 个体生长 → 个体繁殖 → 群体生长 在一定时间和条件下细胞数量的增加（微生物群体生长） 微生物生长: 在微生物学中提到的“生长”，一般均指群体生长，这一点与 研究大生物时有所不同。 第一节 测定生长繁殖的方法 单位时间里微生物数量或生物量（Biomass）的变化 微生物生长： 微生物生长的测定： 个体计数 群体重量测定 群体生理指标测定 评价培养条件、营养物质等对微生物生长的影响； 评价不同的抗菌物质对微生物产生抑制(或杀死)作用的效果； 客观地反映微生物生长的规律； 一、测生长量 测定生长量的方法很多，适用于一切微生物。 （一）测生长量直接法 （二）测生长量间接法 （一）测生长量直接法 测体积法：粗放型，在刻度离心管中测沉降量 称干重法：精确型，离心法和过滤法获得菌体细胞， 微生物的干重一般为其湿重的10％～20％。 测定多细胞及丝状真菌生长情况的有效方法 * 1.测体积：在刻度离心管中离心，测定沉淀多少来确定微生物的生长情况。 2.测干重： 将细胞培养液离心或过滤后，洗涤除去培养基成分后转移到适当的容器中，置100~105℃干燥箱烘干或低温低压干燥（60~80℃）至恒重后，称重。 若是固体培养物，可先加热溶解琼脂， 然后过滤出菌体，洗涤、干燥后再称重。该法适合于单细胞和多细胞微生物的生长测定。 （二）测生长量间接法 1.比浊法 用分光光度法对无色的微生物悬浮液进行测定，一般选用450～650nm波段。 实验测量时应控制在菌浓度与光密度成正比的线性范围内，否则不准确。 在一定波长下，测定菌悬液的光密度，以光密度（optical density, 即O.D.）表示菌量。 若要连续跟踪某一培养物的生长动态，可用带有侧臂的三角烧瓶作原位测定，即不必取样。 2.生理指标法 样品中微生物数量多或生长旺盛，这些指标愈明显，因此可以借助特定的仪器如瓦勃氏呼吸仪、微量量热计等设备来测定相应的指标。 微生物的生理指标，如氮、碳、DNA、ATP等物质的含量，呼吸强度、耗氧量、酶活性、生物热等与其群体的规模成正相关。 常用于对微生物的快速鉴定与检测 一种特定的微生物，每一个细胞中的ATP浓度几乎是一个常数，所以测定这种微生物的ATP含量，即可知其细胞数。 已知细胞数的微生物样品 测定ATP含量 测定未知细胞数的 微生物样品的ATP含量 换算出每个细胞所含的ATP量 即可算出未知样中细胞数 二、计繁殖数 测定繁殖，一定要一一计算各个体的数目。 单细胞状态的细菌和酵母菌 放线菌和霉菌等丝状生长的微生物 计算其孢子数 计算细胞个体的数目 link1 （一）计繁殖数直接法 （二