201512211.2基因工程的基本操作程序(上课用)选编.ppt

小结 构建过程 2、将目的基因导入动物细胞 ①方法：显微注射法 ②受体细胞：受精卵 ③程序： 归纳: 基因工程的基本操作程序 获取目的基因 从基因文库 利用PCR 化学方法人工合成 构建基因表达载体 目的基因、启动子、终止子、标记基因 将目的基因导入受体细胞 农杆菌转化法、显微注射法 目的基因的检测与鉴定 检测：是否插入、转录、翻译 鉴定： 3、将目的基因导入微生物细胞 ①原核生物特点：繁殖快、单细胞、遗传物质少 ②方法： Ca2+处理法 Ca2+处理细胞 细胞壁通透性增大 感受态细胞 表达载体与感受态细胞混合 感受态细胞吸收DNA分子 类型 步骤 检测内容 方法 结果显示 分子检测 第一步 第二步 第三步 个体生物学水平鉴定 四、目的基因的检测与鉴定 转基因生物的DNA上是否插入了目的基因 DNA分子 杂交技术 是否显示 出杂交带 目的基因是否 转录出mRNA 分子杂交技术（DNA和mRNA） 同上 目的基因是否 翻译出蛋白质 抗原 ——抗体杂交 同上 包括做抗虫、抗病的接种实验，以确定是否有抗性 以及抗性的程度；基因工程产品与天然产品的功能 进行活性比较，以确定功能是否相同 目的基因成功表达的标志：通过转录翻译合成蛋白质 归纳步骤 8.利用外源基因在受体细胞中表达，可生产人类所需要的产品。下列选项中能说明目的基因完成了在受体细胞中表达的是 （ ） A.棉花二倍体细胞中检测到细菌的抗虫基因 B.大肠杆菌中检测到人胰岛素基因及其mRNA C.山羊乳腺细胞中检测到人生长激素DNA序列 D.酵母菌细胞中提取到人干扰素蛋白 D 表达 1.2 基因工程的基本操作程序 1、目的基因的获取 2、表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 基因工程基本操作的四个步骤 C 1．基因工程的正确操作步骤是(　　) ①使目的基因与载体相结合 ②将目的基因导入受体细胞 ③验证目的基因的表达是否符合特定性状要求 ④提取目的基因 A．③②④①　　 B．②④①③ C．④①②③ D．③④①② C 一、目的基因的获取 (一)、目的基因主要是______________________ 编码蛋白质的基因 请举出三个以上的例子 （二）、获取目的基因的常用方法有哪些? 1、从基因文库中获取 2、利用PCR技术扩增 3、人工合成 请阅读P9第一和二两段 化学合成法 反（逆）转录法 一、目的基因的获取 （一）从基因文库中直接获取 1.基因文库：概念见P9 2.种类 基因组文库：含有一种生物的全部基因 部分基因文库：只包含了一种生物的部分基因 如：cDNA文库 提取某种生物的全部DNA 限制酶 一定大小的DNA片段 与载体连接 导入受体菌中储存 基因组文库 P 10 基因组文库 某种生物的单链mRNA 单链cDNA 双链cDNA片段 导入受体菌中储存 与载体连接 cDNA文库 反（逆）转录酶 DNA聚合酶 P 10 cDNA文库 基因组文库和部分基因组文库(cDNA文库)比较P10 1.概念： 3.原理： (二)利用PCR技术扩增目的基因 4.前提： 2.目的： 6.过程： 7.特点： 阅读 P 10 最后两段 5. 条件： 1.PCR含义：P10 以_____方式扩增，即____（n为扩增循环的次数） DNA复制（碱基互补配对原则） 模板DNA、原料(四种脱氧核苷酸)、能量、酶（热稳定DNA聚合酶）、引物、温度 指数 2n 有一段已知目的基因的核苷酸序列 大量扩增目的基因 5. 条件： 3.原理： 2.目的： 4.前提： 7.过程： 8.特点： (二)利用PCR技术扩增目的基因 过程 P10 高温变性（解旋为单链） 低温退火（引物与单链互补结合） 适温延伸（在Taq酶的作用下合成 与模板互补的DNA双链） PCR过程： a、DNA变性（90℃-95℃）：双链DNA模板 在热作用下，_____断裂，形成___________ b、退火（复性55℃-60℃）：系统温度降低，引 物与DNA模板结合，形成局部________。 c、延伸（70℃-75℃）：在Taq酶的作用下， 合成与模板互补的________。 氢键 单链DNA 双链 DNA链 PCR动画 PCR技术扩增与DNA复制的比较 结果 酶 场所 解旋方式 不同点 条件 原料 原理 相同点 DNA复制 PCR技术 碱基互补配对 四种脱氧核苷酸 模板、能量、酶 DNA在高温下变性解旋 解旋酶催化 体外复制 细胞核内 热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶 大量的