实验十三、质粒的转化.ppt

实验十三、质粒的转化 一、背景介绍 1.GFP： 绿色荧光蛋白基因 720bp 2. Bla：β-内酰胺酶基因 3. AraC: 阿拉伯糖调控基因 中心法则 二、实验目的 学习感受态细胞的制备 了解质粒DNA转化方法 四、实验材料和用具 大肠杆菌HB101菌株 pGLO质粒DNA 摇床，涂布棒 三、实验原理 1、感受态细胞 具有接受外援DNA分子能力的细胞 2、对照平板 细胞中无质粒DNA转入 无Amp青霉素抗性，在LB/Amp的平板上不生长 3、转化1平板 细胞转入质粒DNA 具有Amp青霉素抗性，在LB/Amp的平板上生长 没阿拉伯糖，则GFP基因沉默不表达，无绿色荧光 4、转化2平板 细胞转入质粒DNA 具有Amp青霉素抗性，在LB/Amp的平板上生长 加入阿拉伯糖，则GFP基因被诱导表达，有绿色荧光 五、方法和步骤 感受态细胞的制备 转化实验 对照 转化 感受态细胞 感受态细胞+5ul质粒DNA 冰浴15min 冰浴15min 42°C热刺激 42°C热刺激 看实验结果 时间：中午12:00-13:00 地点：各自的教室 清洗平板 六、作业 1、描述对照、转化1（LB/Amp）、转化2（LB/Amp/Ara）三块平板上菌落的生长情况 菌落的分布位置：涂布是否均匀 菌落数：计数菌落的数量 2、学期小节 字数不限，内容不限，打印手写都可 * * 周三晚 1座 10 20 26 30 40 50 51 56 1座 10 20 26 周四下午 周四晚 1座 10 20 26 30 40 50 51 56 周五 1座 10 20 26 31 +限制性内切酶 + 连接酶 1.GFP 绿色荧光蛋白基因 2. Bla β-内酰胺酶基因 3. AraC: 阿拉伯糖调控基因 启动子 阅读框 RNA 聚合酶 启动子 阅读框 mRNA 蛋白（性状） 无阿拉伯糖 AraC RNA 聚合酶 AraC AraC GFP 绿色荧 光蛋白 AraC GFP 加阿拉伯糖 AraC AraC RNA 聚合酶 绿色荧光蛋白表达 GFP 0.9mlLB液体 培养，离心 吸去0.8ml后 重悬浮细胞 LB/Amp LB/Amp/Ara 生长且发荧光 生长 0.9mlLB液体 培养，离心 吸去0.8ml后 重悬浮细胞 LB/Amp 不生长