液相色谱-质谱联用仪的原理及应用.ppt

TS： 喷雾探针取代直接进样杆，流动相经过喷雾针 时被加热到低于完全蒸发点5-10℃，体积膨胀 后以超声速喷出探针形成雾状混合物。 优点：可适应较大流速和含水较多的液相流动相。 缺点：分子量局限于200-1000u的化合物； 对热稳定性较差的化合物有比较明显的分解作 用。 热喷雾接口 TS FB： 又称动量分离器。流动相及样品被喷雾成气 溶胶，脱去溶剂后在动量分离器内产生动量 分离，而后经一根加热的转移管进入质谱。 优点：离子化由质谱的EI或CI方式进行，可以获得 经典的质谱图。 缺点：由于离子化手段仍为电子轰击，不是软离子 化方式，因此不适于分析热不稳定化合物； 主要用于分析非极性或中等极性的、分子量 小于1000u的化合物。 粒子束接口 FB FAB：快原子轰击电离源 优点：是“冷”离子源，适于分析热不稳定、难气化 的化合物，尤其是对肽类和蛋白质分析的有 效性在电喷雾接口出现前是其它接口无法相 比的。 缺点：混合物样品中共存物质干扰抑制样品分子的 离子化，造成灵敏度下降； 只能在低流量下工作，严重限制了液相柱的 分离效果。 快原子轰击 FAB 基质辅助激光解析 MALDI MALDI：基质辅助激光解析电离源 优点：特别适合与飞行时间质谱联用，可测分子量 范围高达上百万u，并且具有很高的灵敏 度。 缺点：与FAB相同，混合物样品中共存物质的干扰 也很明显，造成质谱信号很弱或根本没有， 灵敏度下降。 电喷雾电离 ESI ESI：电喷雾电离源 特点： 应用范围广泛； 离子化效率高，对蛋白质而言接近100%； 多种离子化模式供选择：ESI（+）、ESI（-）； 可产生多电荷离子，适于测量大分子量的蛋白质； 属于“软”离子化模式，可分析热不稳定化合物。 大气压化学电离 APCI APCI：大气压化学电离源 特点： 属于“软”电离方式，适于分析质量数小于2000u的弱极性小分子化合物； 多种离子化模式供选择：APCI（+）、APCI（-）； 只产生单电荷离子，主要是准分子离子，很少有碎片离子。 实验室现有的液相色谱-质谱联用仪类型： 液相色谱-质谱联用仪（1100 LC-MSD Trap XCT ，Agilent ，科学楼7楼） 三重四极杆质谱联用仪（ TSQ Quantum Access MAX ，ThermoFisher ，科学楼8楼） 微流控芯片液相质谱串联仪（ 1260 LC, 1200 Nano HPLC-Chip cube-QTOF6520， Agilent ，科学楼8楼） 液相色谱-质谱联用仪 在线真空脱气机 二元或四元梯度液相泵 自动进样器 柱温箱 二极管阵列检测器 液相色谱-质谱联用仪 （1100 LC-MSD Trap XCT） 离子阱质谱仪 ESI电离源 APCI电离源 离子源：ESI和APCI 什么是 MSn ? 该方式是表明多级离子分离和碎裂步骤可产生离子质谱图。 n = 分离和碎裂步骤数目，最小是1（最后一步是全扫描). e.g. MS3 意义 1) 一个母离子的分离和碎裂 2) 由前级碎裂得到的子离子的分离和碎裂 3) 全扫描质谱分析 质量分析器：离子阱（ion trap） 累积 第一级离子分离 第一级离子碎裂 第二级离子分离 第二级离子碎裂 第三级质谱分析Mass A + A1+ A2+ A3+ A4+ A2+ A11+ A21+ A31+ A41+ A11+ A21+ A31+ A41+ MS1 MS2 MS3 MS3的图解 易懂、易用、图型化的控制及分析软件 1. 天然产物鉴定； 2. 生物制药及药物代谢分析； 3. 食品成分分析； 4. 蛋白质及多肽分析； 5. 农药及兽药残留分析。 应用范围 样品要力求干净，不含显著量的杂质，尤其是与分析无关的蛋白质和肽类； 2. 不含有高浓度的难挥发酸（硫酸、磷酸等）及其盐； 3. 样品粘度不能过大，防止堵塞柱子、喷口及毛细管入口。 送样要求 检测器 自动进样器 柱温箱 四元梯度液相泵 三重四极杆质谱仪 三重四极杆质谱联用仪 （ TSQ Quantum Access MAX） 离子源：HESI-II和APCI 加热电喷雾离子源（HESI-II）是采用电喷雾电离与加热辅助气相结合的方法，将溶液中的离子转换成气相中的离子。可分析所有在溶液中能预形成离子的极性化合物。 HESI-II 电离源探针 离子源室 APCI 电离源探针 进样方式 直接进样： （使用注射泵） LC液流不经过色谱分离：自动定量环进样至LC液流（使用注 射泵）； 手动定量环进样至LC液流； 进样至LC液流（使用注射泵）； 自动进样器进样至LC液流