2维高效液相色谱法分析小儿清热止咳口服液中麻黄类生物碱的含量.docx

中英文对照文献 题目：二维高效液相色谱法分析小儿清热止咳 口服液中麻黄类生物碱的含量 姓名：侯阳 专业：制药工程 年级：2011级 班级：2011级制药工程班 学号：2011125015 2015年5月10日 二维高效液相色谱法分析小儿清热止咳口服液中麻黄类生物碱的含量 摘要 目的：小儿清热止咳口服液中麻黄类生物碱的含量分析方法。方法：依据中药成分的复杂性和多样性，通过研制离线的二维高效液相色谱系统，解决成分复杂的中药样品的分离和痕量组分的定量问题。一维柱为Agilent公司的Asahipak ODP50 (4.0 mm×125 mm)，5 μm 粒径，二维柱为八方公司的Aichrom BondAQ C18 (4.6 mm×250 mm)，5 μm 粒径；缓冲溶液为20Mmol的KH2PO4，用H3PO4和三乙胺调pH值为2.7；一维及二维的流动相均为缓冲溶液/乙腈（97/3，V/V），流速为0.8 ml/min；柱温为30℃；DAD检测器的检测波长为210 nm。结果：麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱在进样量分别为0.36～3.6 μg，0.34～3.5 μg，0.32～3.3 μg范围内进样量与峰面积线性关系良好，平均回收率分别为97.4%，98.6% 及100.2%。结论：中药样品的分离明显改善，并且这个系统可用于中药的直接进样分析。 关键词：多维高效液相色谱； 离线； 麻黄碱； 伪麻黄碱； 甲基麻黄碱 多维高效液相色谱法（Multidimensional HPLC，MD-HPLC）利用两个或更多的色谱柱对复杂样品中的待分析组分进行分离，在柱之间利用切换阀将经过初次分离的全部或部分组分选择性地转入另一根或多根不同类型的色谱柱中进一步分离［1～6］。与常规的单柱分离相比，该技术具有更高的选择性、更大的峰容量和更好的分辨率。该技术操作简单，弥补了常规单柱色谱的不足，是一种具有发展潜力的分离分析方法。麻黄碱类药物，麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱具有相似的结构，其中麻黄碱和伪麻黄碱属于同分异构体，是中药麻黄的主要有效成分。麻黄类药物在临床上广泛用于治疗伤风、哮喘和过敏等症。许多含麻黄的中成药、中西复方制剂中都含有麻黄碱类药物［7～10］。目前有关麻黄碱类生物碱的报道已有很多，但由于中药样品中所含物质成分复杂，药物含量极低，直接进样分析困难。采用二维色谱技术可以实现中药样品直接进样分析，过程简单，结果准确。 　　1 器材 　　Agilent 1100系列高效液相色谱仪由脱气机，双元泵，自动进样器，柱温箱及二极管阵列检测器和化学工作站组成。其中柱温箱具有六通切换阀、可进行柱切换。对照品：麻黄碱、伪麻黄碱和甲基麻黄碱均购自中国药品生物制品检定所；样品为郑州市协和制药厂生产的小儿清热止咳口服液；实验用水为娃哈哈纯净水，用0.45 μm的微孔过滤膜过滤；KH2PO4，H3PO4，三乙胺为分析纯；甲醇和乙腈为色谱纯。 　　2 方法与结果 　　2.1 对照品与样品制备精确称取适量麻黄碱、伪麻黄碱、甲基麻黄碱对照品，置50 ml容量瓶中加纯水至刻度，摇匀，配制成浓度分别为450，436，412 mg/L的标准溶液。取10 ml小儿清热止咳口服液，置50 ml容量瓶中加纯水至刻度，摇匀，经0.45μm的微孔过滤膜过滤。所有样品保存于4℃冰箱中备用。 　　2.2 色谱条件色谱柱为一维柱为Agilent公司的Asahipak ODP50 (4.0 mm×125 mm)，5μm 粒径，二维柱为八方公司的Aichrom BondAQ C18 (4.6 mm×250 mm)，5μm 粒径；缓冲溶液为20Mmol的KH2PO4，用H3PO4和三乙胺调pH值为2.7；一维及二维的流动相均为缓冲溶液/乙腈（97/3，V/V），流速为0.8 ml/min；柱温为30℃；DAD检测器的检测波长为210 nm。先将样品在第一维色谱柱中进行预分离，然后利用六通阀进行柱切换，将第1维分离后感兴趣的组分切换至第二根色谱柱，第1维柱中不感兴趣的组分被洗脱走，然后在第二维色谱柱中将感兴趣的组分进行进一步分离。 　　2.3 样品测定及色谱图按上述色谱条件对小儿清热止咳口服液样品及标准品进行2DHPLC分析，与标样混合物的色谱图比较，可知峰1～3分别对应麻黄碱、伪麻黄碱及甲基麻黄碱。同时用二极管阵列检测器在线扫描各个峰的紫外光谱，发现各个峰对应的紫外吸收峰符合麻黄类生物碱的紫外吸收特征。 　　2.4 麻黄类生物碱的工作曲线分别取上述标准溶液0.5，1，3，4，5 ml配制成一系列质量浓度的标准混合溶液，用峰面积（Y）对质量浓度（X，mg/L）作回归分析得到3种麻黄类生物碱的回归方程、相关系数、线性范围及最低检出限（S/N=3）。由此可知，麻黄类生物碱的线性相关性较好。 　　2.5 小