药物代谢物的纯化和鉴定.PDF

药物代谢物的纯化和鉴定 安捷伦分析型纯化系统、安捷伦自动纯化软件和 Agilent 6540 精确质量四极杆飞行时间 (Q-TOF) 液质联用系统 应用简报 药物发现 作者 摘要 Syed Salman Lateef、 药物代谢和药代动力学 (DMPK) 研究通常需要通过质谱 (MS) 鉴定药物代谢 M. Sundaram Palaniswamy 和 物，并在药物开发的后期阶段，通过 NMR 确认代谢物结构。为此，可能需 Smriti Khera 要对代谢物进行纯化。在本应用简报中，将安捷伦自动纯化软件与 Agilent 安捷伦科技有限公司 1260 分析型纯化系统相结合对安非他酮药物代谢物进行纯化。使用通过 Agilent 6540 精确质量四极杆飞行时间 (Q-TOF) 液质联用系统和 Mass-MetaSite 软件采集到的高分辨率精确质量 MS 和 MS/MS 数据对代谢物进行鉴定。 前言 实验部分 代谢物生成 在药物发现中，可靠地鉴定代谢物的 工作流程 在 20:80 （乙腈:水）溶液中配制 10 mM 化学结构对于药物化合物评估至关重 的安非他酮 (Sigma-Aldrich) 储备液，并 代谢物纯化和鉴定的一般工作流程如 要。在药物发现阶段，通常将高分辨 用磷酸盐缓冲液 (0.1 M, pH 7.4) 将其稀 图 1 所示。在本研究中，通过在人类 率精确质量数据与 MS/MS 碎裂模式 释至最终温育浓度 250 µM。在磷酸盐 肝微粒体中温育安非他酮产生代谢 相结合用于生成分子式，并且有助于 缓冲液中，将人类肝微粒体 (HMMC- 物。在分析柱上，使用一般梯度运行 了解推断的代谢物结构。使用代谢物 3A, Life Technologies) 和 NADPH (N5130, 方法对代谢物进行分析。由于所分析 结构预测软件有利于对代谢物进行结 Sigma-Aldrich) 混合至最终温育浓度 的代谢物具有不同的极性，因此一般 3 ° 构鉴定。在药物发现的后期，可能需 （分别为 2 mg 和 2.4 mM）。在 37.5 C 采用梯度曲线。采用与 Agilent 6150 单 要使用核磁共振 (NMR) 进行结构确 和 150 rpm 的转速下温育反应 120 分 证。另外，需要对主要的药物代谢物 四极杆质谱仪相连接的 Agilent 1260 钟。加入等体积 6% 甲酸的乙腈溶液 Infinity 分析型纯化系统对代谢物进行 开展毒理学研究。因此，需要将代谢