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15 噬菌体展示技术的原理要点
噬菌体展示技术的原理 噬菌体展示的基本概念 将外源蛋白质或多肽的基因表达产物与噬菌体衣壳蛋白融合,并在其表面展示,同时将其遗传密码信息整合到个体噬菌体的基因组中。直接将可见的表达型与其基因型联系在一起,利用其配体的特异性亲和力,将所感兴趣的蛋白 质或多肽挑选出来。 多年来,噬菌体展示技术被用于抗体的制备、多肽及蛋白质和酶的制备。特别是近几年来,该技术被作为一种新工具用于多肽和蛋白质药物的发现与研制、蛋白质与蛋白质的相互作用及蛋白质与DNA相互作用的研究、蛋白质结构和功能的研究以及基因治疗药物的定向传递等多方面 的研究。 固相 淘选系统 完整细胞 组织，器官 常规法 淘选方法 正负法 竞争法 噬菌体（M13, T7, T4, ?) 病毒（反转录病毒，杆状病毒） 表面展示系统 细菌（葡萄球菌，E. Coli) 酵母 体外共价连接（蛋白—DNA, 蛋白—RNA) 诊断 被动免疫 抗体 蛋白质结构分析 药物导航 蛋白质纯化 受体—配体 信息传递 蛋白质—蛋白质 诘抗剂 蛋白质—DNA 抑制剂 蛋白质—其他 多肽 诊断 基因表达控制 中和活力 药物及药物导航 酶及底物 单克隆抗体 噬菌体抗体 杂交瘤技术 展示技术 宿主细胞: 杂交瘤 细菌 筛选范围 : ~103 107?109 时间: 几个月 几周 操作: 繁杂 相对简单 免疫: 必须 可避免 人源抗体: ? + 费用: 高 低 生产量: 有限 无限 基因获取: 再克隆
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