人教版教学课件选修1–DNA的粗提取与鉴定(版面精美流程图详细).ppt

DNA粗提取与鉴定 两种材料的DNA粗提取与鉴定过程 以鸡血为材料 以花菜为材料 DNA的鉴定 * 学习目标 知识目标 1、通过尝试对植物或动物组织中的DNA进行粗提取，了解DNA的物理化学性质。 2、理解DNA粗提取与鉴定的原理。 能力目标 掌握DNA粗提取及鉴定方法，能利用DNA的性质进行实验设计和操作。 态度观念目标 通过对DNA的粗提取的实验过程的设计及操作，锻炼科学的思维方法，培养实事求是的科学态度。 1、鸡血细胞做实验材料，一是因为鸡血细胞核的DNA含量丰富，材料易得；二是鸡血细胞极易吸水胀破。 2、DNA在不同浓度的NaCl溶液中溶解度不同， 3、嫩肉粉的主要成分是木瓜蛋白酶，其作用是分解蛋白质，使提取出的DNA纯度较高 4、预冷的乙醇溶液具有以下优点：一是抑制核酸水解酶活性，防止DNA降解，二是降低分子运动，易于形成沉淀析出，三是低温有利于增加DNA分子柔韧性，减少断裂； 5、洗涤剂等去污剂可以溶解细胞的细胞壁，破坏细胞膜，同时也能使蛋白质变性； 6、在60—75度条件下加温处理，蛋白质变性，而DNA结构不会受到破坏，提取纯度较高的DNA 7、甲基绿能使DNA染成绿色 根据以上原理可设计提取和纯化DNA的方案： 方案一：30mL含DNA的滤液＋2mol/L NaCl→同方向搅拌，DNA溶解→加入蒸馏水→DNA析出→过滤得到过滤物→放到2mol/LNaCl溶液中溶解→DNA-NaCl溶解液 方案二：30mL滤液＋嫩肉粉（木瓜蛋白酶）→静置10～15分钟→DNA滤液 方案三：30mL滤液→60～75℃恒温保温10~15分钟→过滤获得DNA滤液 ①释放组织细胞中的DNA， ②粗提取DNA， ③将粗提取的DNA进一步纯化， ④鉴定提取物是DNA １.取新鲜植物组织（菜花）放置于冰箱中冷却1~2天 ２.取30克植物组织,切碎,置于研体中,倒入适量洗洁精,加入适量的NaCl,充分研磨10分钟 ３.过滤研磨液，取上清夜置于冰箱中冷却几分钟 ４.取1倍体积的上清液，加入2倍体积的95%的冷酒精当中，用玻棒轻轻搅拌，沉淀3~5分钟后可见白色絮状DNA缠绕于玻棒末端。 ５.DNA的提纯同鸡血细胞为实验材料的实验操作步骤6、7，具体数据有一定的差异。 ６.鉴定 １. 0.1g/ml的柠檬酸钠溶液,按1:2的比例与新鲜鸡血混合搅拌均匀。 ２.将血液置于冰箱中24小时,弃上部澄清液 ３.取烧杯中的血细胞液约5~10ml加入到100ml烧杯中，向烧杯中加入20ml蒸馏水，用玻棒沿一个方向快速搅拌5分钟，加速血细胞在低渗溶液中的破裂 ４.将2mol/L的氯化钠溶液50ml缓缓倒入烧杯中，用玻棒沿一个方向搅拌，使DNA溶解于氯化钠溶液中，滤除杂质，获得粘稠状的鸡血细胞DNA提取液 ５.将鸡血细胞DNA提取液置于较大的烧杯中，沿烧杯内壁缓缓倒入蒸馏水，并不断搅拌，直到粘稠状DNA不再析出为止。用玻棒搅拌，使析出的DNA缠绕于玻棒末端。 ６.将析出的DNA再溶解于2mol/L的氯化钠溶液中。 ７.在DNA的氯化钠溶液中倒入95%的酒精50 ml（冷却过的酒精效果较好），使DNA再次析出，用玻棒搅拌，使DNA再次缠绕于玻棒末端。 ８.DNA的鉴定：取两支试管，各加入2ml0.015氯化钠溶液，将DNA溶解于其中一支试管中，另一支做为对照组。然后，在两支试管内加等量的二苯胺试剂，水浴加热10min左右，冷却，观察实验现象。 植物组织 鸡血细胞 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 2mol/L 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 5、过滤→取纱布上的滤物 纱布过滤 6、再次溶解DNA 2mol/LNaCl溶液 取滤物 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 7、加冷酒精使DNA析出（纯化） 冷酒精 鸡血细胞液中DNA的粗提取实验流程图 DNA的粗提取与鉴定 实验原理 DNA在不同浓度NaCl溶液中溶解度不同 DNA与其他细胞成分在酒精中溶解度不同 DNA和蛋白质对酶、高温和洗涤剂耐受性不同 DNA与二苯胺呈现蓝色反应 DNA粗提取 选择适宜材料 破碎细胞 DNA的溶解和析出 DNA的纯化 鉴定DNA 与二苯胺混合，沸水浴，呈现蓝色反应 总结： 1. 下列关于DNA粗提取与鉴定的说法正确的是 A．氯化钠的浓度越低，对DNA的溶解度越大 B．人血也可代替鸡血进行实验 C．柠檬酸钠的主要作用是加速血细胞破裂 D．DNA不能溶于酒精 2. 在破碎鸡血细胞时，要先加入20ml的蒸馏水，其作用是 A. DNA溶解于水 B． 血细胞破裂，DNA释放 C．稀释血液，防止凝固 D． 有利于搅拌 3. 若选择的实验材料为植物细胞，破碎细胞时要加入一定量的洗涤剂和食盐，加入食盐的目的