后基因组时代药物高通量筛选.ppt

后基因时代药物筛选新技术的发展 连智慧 谢谢 分子水平药物筛选 ——均相筛选方法 荧光方法: 第三种：荧光共振能量转移分析法：是发生在供体分子和受体分子之间的能量转移 供体分子：镧系元素螯合物Eu(K)——荧光寿命长——能量供体者 受体分子：有机探针——荧光寿命短——能量接受者 当供体分子和受体分子靠近(1～7nm)，并且二者的波长符合 共振条件时发生能量转移，能量转移效率是供体分子和受体分 子间距离的函数，距离越短，能量转移效率增加 最终检测的是受体分子的荧光强度 第四种：时间分辨荧光能量转移分析法 分子水平药物筛选 ——均相筛选方法 荧光方法: 第三种：荧光共振能量转移分析法： 分子水平药物筛选 ——均相筛选方法 荧光方法: 第三种：荧光共振能量转移分析法： 分子水平药物筛选 ——均相筛选方法 比色检测法 比色检测主要用于检测具有光吸收性质的物质浓度，根据 光经过被检测样品后被吸收多少，评价吸收光的物质的含量， 主要包括可见光和紫外光的比色分析 分子水平药物筛选 根据分子靶点的性质以及筛选的样品库的特点，选择不同的检测方法 均相筛选法 基于药物与靶蛋白亲和性筛选 固定化靶分子筛选法 其它：圆二色法等 分子水平药物筛选 ——根据药物与靶蛋白亲和性筛选化合物 利用化合物与靶蛋白之间的亲和作用，并且亲和力越强， 该化合物就越有可能成为药物先导化合物，用靶蛋白将少数 有活性的化合物从大量无活性的化合物中直接分离出来 优点：不存在蛋白失活的问题 超滤法 毛细管电泳法 质谱法 核磁共振法 分子水平药物筛选 ——根据药物与靶蛋白亲和性筛选化合物 超滤法: 化合物 靶蛋白 在溶液中 复合物 游离态 通过半透膜 复合物在一侧 游离态在一侧 复合物 变性 活性化合物和靶蛋白 质谱 活性化合物 平衡 缺点：不能给出配基结合的强度顺序 分子水平药物筛选 ——根据药物与靶蛋白亲和性筛选化合物 亲和毛细光电泳法: 根据电泳中有亲和力配体的移动速度不同定量的评价它们的 亲和活性。与受体有亲和作用的配体在电泳中有结合和解离的过程， 使其子啊电泳中的速度减慢，与其他组分分开，流出速度与亲和常数 有关，流出组分用电喷雾离子化质谱直接测定其结构 要求：受体和配体的都很小 靶标和化合物能快速达到平衡 分子水平药物筛选 ——根据药物与靶蛋白亲和性筛选化合物 质谱法:生物亲和选择性LC/MS 靶蛋白与化合物孵育 ESI质谱 复合物离子出现在高质量数 化合物离子出现在低质量数 复合物离子的二级质谱 释放出配体 并判断配体的亲和力 改变碰撞电压 电喷雾的条件要求足够温和，以保证第一次质谱过程中复合物峰强度 分子水平药物筛选 ——根据药物与靶蛋白亲和性筛选化合物 质谱法: 分子水平药物筛选 ——根据药物与靶蛋白亲和性筛选化合物 核磁共振法: 与游离态配体相比，结合态配体的原子核自旋的化学位移和弛豫 时间，以及配体分子的扩散系数等NMR特性将发生变化，配体分子在与 受体结合时具有特定的空间取向，因此，配体分子中不同位置的原子核 的NMR特性的改变也各不相同 分子水平药物筛选 ——根据药物与靶蛋白亲和性筛选化合物 核磁共振法: 分子水平药物筛选 根据分子靶点的性质以及筛选的样品库的特点，选择不同的检测方法 均相筛选法 基于药物与靶蛋白亲和性筛选 固定化靶分子筛选法 其它：圆二色法等 分子水平药物筛选 ——固定化靶分子筛选法 生物芯片方法: 生物芯片是将生物分子如多肽、抗原、抗体、基因组DNA等固定于固相 介质上形成的生物分子点阵，待分析样品中的生物分子与生物芯 片的探针分子发生杂交或相互作用后，利用激光共聚焦显微扫描 仪对杂交信号进行检测和分析 分类： 基因芯片 蛋白质芯片 组织芯片 细胞芯片 糖芯片 微流路芯片 芯片实验室 分子水平药物筛选 ——固定化靶分子筛选法 生物芯片方法: 基因芯片： 是指将大量的探针分子固定于固相支持物上然后与标记的样品 分子进行杂交反应，通过对杂交信号的检测分析获取样分子的 数量和序列信息 探针分子：cDNA片段、基因组片段、寡核苷酸、或核酸类似物 分子水平药物筛选 ——固定化靶分子筛选法 生物芯片方法: 基因芯片： 分子水平药物筛选 ——固定化靶分子筛选法 生物芯片方法: 蛋白芯片： 是指将大量蛋白质有规则地固定到某种介质载体上，利用蛋白 质与蛋白质、酶与底物、蛋白质与其他小分子之间的相互作用 检测分析蛋白质的一项技术 蛋白芯片比基因芯片更能反映生命活动的本质，应用前景更为广泛 分子水平药物筛选 ——固定化靶分子筛选法 生物芯片方法: 蛋白芯片： 分子水