斜带石斑鱼干扰素调节因子8基因的鉴定与表达模式-doi10.docVIP

doi:10.6043/j.issn.0438-0479.201604029 斜带石斑鱼干扰素调节因子8贾芹芹12，黄 贝1, 2熊 静1, 2段利朋1聂 品1黄文树1, 2, 3 （1. 集美大学水产学院，2. 鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心，3. 福建省海洋生物资源开发利用协同创新中心，福建 厦门361021） 摘要：干扰素调节因子8（IRF8）是干扰素调节因子家族中的一个转录因子。本研究利用简并PCR和cDNARACE）技术获得了斜带石斑鱼（Epinephelus coioides）IRF8（EcIRF8）全长cDNA序列，可编码422，含有脊椎动物IRF家族的特征性结构域，即N-端保守的DNA结合域（DBD），其中包含5个特征性的色氨酸残基和1个核定位信号，以及C-端多样化的干扰素调控因子结合结构域（IAD）。与绝大多数脊椎动物的IRF8相似，EcIRF8基因组也是9个外显子/8个内含子的结构。EcIRF8在正常养殖的斜带石斑鱼肝脏中高水平转录表达。活体Poly I:C）刺激后6 h，EcIRF8在头肾、中肾、胸腺、肝脏和肠中的转录表达显著上调（0.05），其中在中肾中的上调幅度最大，是对照组的106倍；副溶血弧菌刺激后24 h，EcIRF8在肝脏中转录表达量也显著上调（0.05），然而，上调倍数仅为对照组的9.37倍。结果表明，EcIRF8基因可能主要参与斜带石斑鱼的抗病毒免疫反应。 关键词：干扰素调节因子8；斜带石斑鱼；Poly I: CInterferon Regulatory Factors, IRFs）是调节干扰素（Interferon, IFN）以及干扰素相关基因表达的转录因子，能与IFN基因启动子及IFN刺激基因反应元件特异性结合，从而调节其转录表达[1-2]。1988年，Miyamo等人首次发现了人类IRF1这一转录因子，其能结合在IFN-β上游调控序列上，从而调节病毒诱导的IFN-β基因的转录[3]。随后，陆续发现了其他IRFs。迄今，在哺乳动物、鸟类和鱼类中分别发现了9、10和11种IRF因子[4-6]。根据结构特征和系统进化，IRF可分为4个亚家族：IRF1亚家族，包括成员IRF1、 IRF2和 IRF11；IRF3亚家族，包括成员IRF3和 IRF7；IRF4亚家族，包括成员IRF4、 IRF8、 IRF9 和IRF10；IRF5亚家族，包括成员IRF5和 IRF6[6]。 干扰素调节因子8 （interferon regulatory factor 8, IRF8），也称为干扰素保守序列结合蛋白（interferon consensus sequence binding protein, ICSBP），是IRF4亚家族的一种转录因子 [7-8]。在哺乳动物中，主要存在于淋巴细胞、巨噬细胞以及树突状细胞中[4, 9]。IRF8蛋白质分子含有IRF家族两个重要保守结构域：N端的DNA结合域（DNA binding domain, DBD）和C端的干扰素调控因子结合结构域（IRF association domain, IAD）。DBD结构域含有111~112个氨基酸残基，其中有5个位置高度保守的色氨酸残基，序列高度保守，负责与干扰素刺激反应元件as associated phosphatase 1, FAP-1）和TLR3（toll like receptor 3）基因的转录，同样也可正向参与调节巨噬细胞的分化以及上调巨噬细胞介导的炎症反应相关基因的表达[15-17]；当IRF8与IRF4结合形成复合体，可以促进B淋巴细胞的成熟和ISG15（interferon stimulated gene 15）基因的活化[4, 18-19]。因此，IRF8是一个双向调节的转录因子[20]。IRF8 可促进pDC分泌IFN，表明 IRF8 参与了机体的抗病毒应答[21-22]。缺失IRF8基因的小鼠，易受脑膜炎病毒、李斯特菌等感染，其巨噬细胞不产生IL-12，对γ-IFN和LPS无响应[23]。 在鱼类中，2010年，Jason等首先报道了虹鳟（Oncorhynchus mykiss）IRF8基因（OmIRF8） [24]，随后，在条石鲷（Oplrgnathus fasciatus）[25]、大菱鲆（Scophthalmus maximus）[26]、牙鲆（Paralichthys olivaceus）[27]、大西洋鳕（Gadus morhua）[28]、半滑舌鳎（Cynoglossus semilaevis）[19]和斑马鱼[29]（Danio rerio）等鱼类中又相继报道了IRF8基因。该基因在绝大多数鱼类脾脏中高水平表达，而在其他组织中的表达量有较大差异。例如，在虹鳟、牙鲆、大菱鲆和大西洋鳕的肝