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分解纤维素霉菌的分离,纯化与鉴定 　　摘要: 以滤纸纤维素为碳源,从我院青苑和南区草地的土壤中分别分离1株能分解纤维素的真菌菌株。分别对其进行了滤纸分解度、羧甲基纤维素酶活力(CM Case)、滤纸糖化力(FPA)和天然纤维素酶活力的测定,结果表明:①一种黑色霉菌对滤纸的分解能力最强,不到12小时滤纸全成糊状;②同时羧甲基纤维素酶活力、滤纸糖化力和天然纤维素酶活力也最高,分别为2.568(mg / ml) 30 min 、0.28(mg / ml).h 和227(mg / ml).d。 　　Abstract: Two strains of fungi decomposing cellulose were isolated from the soil of our campus taking the filter paper cellulose as carbon resource.For these strains,the experiments of decomposition of filter paper,determinations of CMC enzyme activity,FPA and natural cellulase activity were done.The results showed that:(1)It was the faster that the filter paper was decomposed by one black strain,and the filter paper was changed into paste during less than for 12 h.(2)CM C enzyme activity,FPA and natural cellulose activity of the strain were highest in five strains,reached 2.884(mg/mL)?30 min,0.36(mg/mL)?hand 2768(mg/mL)?d,respectively. 　　关键词:纤维素酶;滤纸;酶活力;纤维素分解菌 　　Key words: cellulase;filter paper;enzyme activity;cellulose―decomposing fungus 　　中图分类号:TQ352.2文献标识码:A文章编号:1006-4311(2010)16-0144-02 　　 　　0引言 　　纤维素是所有植物的主要组分,构成了植物干物质的1/3～2/3,世界上纤维素的年产量估计可达4×1010t(Pierre Beguine,1990),因而,纤维素是世界上最丰富而又不断新生的资源。有取之不尽,用之不竭的特点。然而,这种资源的大部分现在是作为废物而被抛弃掉。在自然界中,这些“废物”是通过纤维素分解菌,即能产生纤维素酶的微生物将其自然分解的。在我国纤维素资源极为丰富,每年仅农作物秸秆产量就高达7.0×108t,约相当于我国北方草原年打草量的50多倍,绝大部分地分没有得到充分利用。在农村,秸秆主要用作燃料、畜禽饮料与积肥,不仅利用率低,还对环境造成污染[1]。因此,合理开发和科学利用农作物秸秆这一丰富的可再生资源是各国政府及广大科技工作者十分关注的问题。但是纤维素很难被分解利用,如何将纤维素转化为能直接利用的资源和能源是摆在人们面前的一个难题。利用微生物产生的纤维素酶将其转化为人类所需的能源、食品和化工原料具有重要的现实意义。近年来,对秸秆类纤维素物质的利用主要采用生物法,既利用微生物将纤维素、半纤维素降解并转化为菌体蛋白的方法。因此,分离和筛选高酶活的菌种显得尤为重要。本研究在广泛搜集试材的基础上,分离筛选到一株酶活力高的纤维素分解菌。 　　1材料和方法 　　1.1 样品来源样品分别为富含纤维素分解菌的玉米地土壤、牛粪和酒糟。 　　1.2 培养基①分离平板培养基;②液体培养基。 　　1.3 滤纸纤维素的制备将滤纸剪成1cm宽,6cm长的滤纸条。 　　1.4 菌株的分离、纯化采用稀释涂布平板法进行菌种的分离和纯化。 　　1.5 菌落的观察和菌的鉴定对细菌进行革兰氏染色,显微镜观察培养不同时间的细菌形态。将纯化培养的细菌分别接种于葡萄糖、乳糖、麦芽糖、蔗糖、棉子糖、木糖、阿拉伯糖,并进行明胶液化、淀粉水解、V-P测定、吲哚试验、H2O2酶试验、硝酸盐的微量发酵管,37℃培养24―48h后观察结果。根据《伯杰氏系统细菌学鉴定手册》进行鉴定。 　　1.6 酶活力测定 　　1.6.1 标准曲线的绘制本研究采用3,5-二硝基水杨酸比色定糖法(DNS)测定酶解液中还原糖含量,取9支比色管,分别按表1顺序加入各种试剂