一株橙色黏球菌的筛选及初步鉴定.pdfVIP

第 40 卷第 1 期 河南师范大学学报(自然科学版) Vol.40 No.1 2012 年 1 月 lournalof Henan Normal University(Natural Science Editioη) lan.2012 文章编号:1000一2367(2012)01 →0138-04 一株橙色却球菌的筛选及初步鉴定 患明，张宜涛，田青，张开平 (河南工业大学生物工程学院.郑州 450001) 摘 要:从土样中通过菌体诱导和纤维素诱导法来富集和选择性分离秸细菌，将初筛菌株进行抗菌谱测定，挑 选抑菌活性强的一株(编号为 hg59) 进行系统分类鉴定.结果表明:该菌株革兰氏染色阴性，营养细胞呈杆状，两头稍 尖，大小(5~的 μmX (0. 3~0. 的 μm，蒙古抱子为卵圆形或椭圆形，菌落生长初期为淡黄色，渐变成橙黄色，薄而向边 缘扩展，有滑动痕迹，对 G+ ， G 菌均具有抑菌活性，其中对枯草芽抱杆菌和醋酸杆菌抑菌效果明显，对米曲霉则较 差.经形态观察、生理生化测定和 16S rDNA 序列分析，初步鉴定为橙色秸球菌(Myxococcus fulvus strain). 关键词:蒙古球菌;分离;鉴定;抑菌活性 中图分类号:Q939.15 文献标志码:A 蒙古细菌是原核生物中→类具有复杂多细胞行为的革兰氏阴性细菌闷，因其代谢产物丰富，作用机制多样 等而倍受关注.茹细菌产生的次级代谢产物的数量仅排在放线菌和芽抱杆菌之后山，其生物活性物质在抗真 菌[3J 、抗凝溶栓蛋白[4J 、抗肿瘤町等方面作用明显，尤其是由纤维堆囊菌 Soce90 产生的次级代谢产物埃博霉 素 A 和 B，表现出比紫杉醇更好的抗癌优越性[61 ，激发了研究者们对蒙古细菌研究的更大热情.本研究从郑州 郊区采集土样，筛选到一株对革兰氏阳性和阴性菌均有较好抑菌作用的黠细菌，为开发新型抗菌药物奠定了 基础. 1 材料与方法 1. 1 材料 1. 1. 1 材 料 土样:采自郑州郊区的果园、腐木和麦田，风干后保存备用，使用前采用一定浓度的制霉菌 素溶液进行预处理. 1. 1. 2 试剂 PCR Master Mix(上海莱枫公司h通用引物(上海生工合成);溶菌酶(美国 Amresco 公司) ; 其余试剂均为国产分析纯. 1. 1. a 仪器 PCR 仪(德国 Biometra 公司) ;Biofuge 台式高速冷冻离心机(德国 Heraeus 公司);YSIOO 显 微镜(日本尼康公司);HZQ-Q 全温振荡器(哈尔滨东联电子公司)等. 1. 1. 4 培养基 (l )WCX 培养基(g/L):CaC1 • 2H 0 1 , Agar 15.0 ,pH 7.2 ，灭菌后，加入用微孔滤膜过 2 2 滤后的制霉菌素至终被度 25 mg/L;(2)YWCX 培养基:在 WCX 培养基上用灭过菌的浓度较大的酵母悬液 划交叉线;(3)ISCX 培养基(g/L) :KN0 1. 0 , FeC1 • 6H 0 O. 2 , K HP0 1. 0 , MnS04 • H 0 0. 1.CaC1 • 3 3 2 2 4 2 2 2H 0 1. 0 , MgS0 • 7H 0 1. 0 ，酶解酷素 O. 02 , Agar 15. O, pH 7.2 ，灭菌后加入滤膜除菌的制霉菌素至终 2 4 2 浓度 25 mg/L，平板表面铺小块元菌滤纸川的VY/2 培养基(g/L): Yeast power 5. 0 , CaC12 • 2H 2 0 1. 0 , VB12 0.000 5 ,Agar 15.0 ,pH 7.2; (5)CAS 培养基 (g/L) :Casitone 10 ,MgS