一步法TaqMan(R)探针实时荧光定量RT-PCR快速检测PRRSV的建立及初步应用.pdfVIP

浙江农业学报 Ácω Agriculturae Zhejiange n.sis , 2012 ,24( 3) :396 -403 路斌，袁秀芳，徐丽华，等.→步法 TaqMan@探针实时荧光定量 RT-PCR 快速检视~ PRRSV 的建立及初步应用[J]. 浙江农 业学报，2012 ， 24(3) :396 -403. 一步法 TaqMan@ 探针实时荧光定量 RT-PCR 快速检测 PRRSV 的建立及初步应用 路斌12 ，袁秀芳l ，徐丽华l ，李军星l ，郭 勇 l ，王一成1 ， • (浙江省农业科学院畜牧兽医研究所，浙江杭州 310021 卢浙江省海盐县畜牧兽医局，浙江嘉兴73ω70) 摘 要:根据猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 的序列，设计了 1 对特异性引物初 l 条 T叫Man@探针，建立 了一步法俭测 PRRSV 的荧Jt. 定量 RT-PCR 方法。结果表明，建立的方法具有较离的特异性，与 PCV ,JEV , SFV ， PRV ， PPV 无交叉反应;可以枪测到 10 个拷贝数的模板RNA 或1 个TCID目的 PRRSV ，比常规 RT-PCR 方 法的灵敏度高 10 倍;对同一样品进行4 次重复试验，变异系数(CV) 1%，具有较好的重复性。应用建屯的 荧光定量 RT-PCR 和常规 RT-PCR 对72 份 PRRS 疑似病例肺组织进行平行检测，结果荧光定量 RT-PCR 检出 40 份阳性，高于常规 RT-PCR 方法(28 份阳性)。建立的荧光定量 RT-PCR 方法特异性好、灵敏度高，而且快 速简便，可用于 PRRSV 的实验室快速诊断和流行病学调查。 关键词:猪繁殖与呼吸综合征病毒;实时荧光定量 RT-PCR; 一步法 中图分类号: S 858.28 文献标志码:A 文章编号:1ω4 -1524(2012)03 -0396 -08 Development of one-step real-time fluorescent quantitative RT-PCRωsay for detection of porcine reproductoηsyndrome virus strains 1 1 LU Binl.2 , YUAN Xiu-fang ,XU Li-hua , LI Jlll1-旧时， GUO Yong ,WANG Yi-cheng •• (1/，凡stitute 0/Ánimal Hu.sb时ry and Veteri町， Zhejiang Ác耐用歹 0/Agricultural ienceJ, fl，吨纳ou 31ω2/ ， Chi- na; 2Animal Hw;bandry and ~也terinary Bureau 0/Haiyan Courúy 01 Zhejia略， Jíaxù喀 3143ω， China) Abstract: To identify porcine 陀productive and syndrome virus (PRRSV) rapidly using real-time RT-PCR tech- nique , primers and TaqMan@ probe were designed based on the PRRSV s叫uence. The fluorescent quantitative RT- PCR 国say for detection of PRRSV w回回tablîshed. Its specificity , sensîtivity and stabîJîty were examined. The assay W嗣 also proven to be specific based on the 1宅sults that no amplification w幽 found by detecting RN