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伏马菌素B1单克隆抗体的制备及免疫学检测方法初步应用.pdf
1012
畜牧兽医学报 47 卷
高、细胞生长旺盛的细胞孔进行有限稀释克隆化，之
值/Bo. 以 FB，浓度的对数值为横坐标，B/B。为纵
后扩大培养、液氮冻存。 坐标，制作 mAbs 的抑制曲线，可得出 IC
。
so
1. 3. 5 抗 FB， mAbs 的大量制备 采用动物体
ELISA 检测步骤如下: (1)以包被原
间接竞争
8
最佳工作浓度包板，每孔 50μL， 37 .C 温育 2 h 后，
内诱生腹水法制备 FB 单抗:向 BALB/c
周左右
1
小鼠腹腔注射液体石蜡，0.5 mL .只一1 ， 10 d 后腹 PBST 洗板; (2) 用 5% 猪血清的 PBST 封闭，每孔
腔注射单克隆阳性细胞 0.5 mL .只 (0.5~lX 220μL， 37 .C 温育 1 h ，洗板; (3)FB，浓度设置为 0 、
106 ) , 8 ~ 10 d 后抽取腹水，离心除去油脂沉淀 10 、 20 、 40 、 80 、 160 、 320 ng. mL- ，每孔 50μL，加人
个
后，即得 FB， mAbs。
50μL 抗 FBl 抗体，稀释液为 PBS，设置阴性对照
1. 3. 6 单克隆抗体的鉴定 (NC) 和空白对照(BC) , 37 .C 温育 15 min 后洗板;
1. 3. 6. 1 单克隆抗体的纯化:采用辛酸-硫酸镀 (4) 加入 5% 猪血清的 PBST 稀释 1 000 倍稀释的
法[叫纯化 mAbs 蛋白。 10% SDS检测蛋白 GAM-IgG-HRP，每孔 50μL; (5) 加酶底物 TMB
的纯度并估算蛋白的相对分子质量。 显色液，每孔 50μL，室温反应 10 min; (6) 终止显
1. 3. 6. 2 抗体亚类的测定:采用抗体亚类试剂盒测 色反应，加人终止液 2 mol • L- H S0 ，每孔 50
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