广西菲牛蛭提取物抗动物血栓形成的作用.doc

广西菲牛蛭提取物抗动物血栓形成的作用 水蛭是我国传统中药，主要用于治疗痞块、血瘀、闭经和跌打损伤。广西菲牛蛭唾液腺分泌物亦富含菲牛蛭素、纤溶酶、透明质酸酶、血管扩张剂等多种肽类物质。本实验室采用离子交换和凝胶过滤等方法从广西菲牛蛭中分离纯化出富含菲牛蛭素、纤溶酶的提取物并利用该提取物研究抗动物血栓效应，以期开发新型的抗血栓生物制剂。 1 材料与方法 1.1 药物： 菲牛蛭提取物(100 ATU／m1)，由广西医科大学蛇毒研究所提供。 1.2 动物： 家兔，体重l.8～2.5 kg；SD大鼠，体重200～300g；动物雌雄兼用，均为清洁级，由广西医科大学实验动物中心提供。 l.3 试剂和仪器： 戊巴比妥钠、枸橼酸钠、电子天平、秒表。体外血栓形成仪：按Chandler氏体外血栓形成装置，蠕动泵改装的泵轴装一个有机玻璃圆盘，有内径4 mill、长250 mill、半径38 mm的聚氯乙烯管环，固定于圆盘上，管环平面与地平夹角为74。，管环内可盛血液，整个仪器置于自动控温培养箱中。 l.4 实验方法 l.4.1 家兔体外血栓形成实验： 取家兔32只，随机分为4组，每组8只，各兔静脉注射1 戊巴比妥钠(30 mg／kg)麻醉。分离家兔股动脉，取血1ml注入聚乙烯管中，各给药组(1.5、0.75、0.5 ATU 3个剂量组)在管中注入0.2 ml菲牛蛭提取物，对照组注人相同体积生理盐水，按Chandler氏法，使血液在37℃条件下以16 r／rnin的速度在体外血栓形成仪上旋转10 min，制备血栓。用滤纸吸干血栓水分，称取血栓 湿重，湿血栓自然风干6 h，为干血栓。 l.4.2 大鼠血栓形成实验： 以60 ATU／kg剂量菲牛蛭提取物股静脉注射SD大鼠，分别于给药前、给药后5、10、15 min从腹主动脉抽血1 ml，按上述Chandler氏改良法制备血栓，观察水蛭素对血栓形成的抑制作用。 1.4.3 大鼠静脉血栓形成实验： 采用Reyers法改良制备大鼠静脉血栓模型，取大鼠10只，随机分成2组(水蛭素提取物60 ATU／kg组和生理盐水对照组)，每组5只，腹腔注射1%戊巴比妥钠(30 mg／kg)麻醉后，开腹分离下腔静脉，于左肾下方用线结扎，给药组由静脉注射水蛭素，对照组给予等量生理盐水，20 min于结扎处下方2cm 处结扎血管，阻断血流，2h后，纵行剖开下腔静脉取出血栓，称湿重，风干6h称 干重。 1.4.4 家兔动脉血栓形成实验： 采用Teruhiko法制备家兔动脉血栓模型，取家兔6只，注射1%戊巴比妥钠(30 mg／kg)麻醉，分离左侧的颈总动脉和右侧的颈外静脉，在7cm的聚乙烯管中放一根预先称重的4号手术线。以3.8 的枸橼酸钠浸润管壁后插入左颈动脉和右颈静脉之间，术后开放血流后15 min，取出手术线称重，减去原线重量即为药前血栓湿重。然后静脉注射菲牛蛭提取物，于给药后15、30、45、60min分别测定聚乙烯管中手术线重量，减去原线重量，即得药后不同时段的血栓湿重，风干6 h，称血栓干重。并计算抑制率[抑制率=(对照组血栓重量-给药组血栓重量)／对照组血栓重量×100 ]。 1.4.5 统计学处理： 实验数据采用成组设计方差分析处理，各项指标均以(±s)表示。 2 结 果 2.1 菲牛蛭提取物对家兔体外血栓形成的影响： 大、中剂量组与对照组相比，菲牛蛭提取物对家兔体外血栓形成比较，差异有统计学意义(P 0.05)，血栓抑制率为24.3～100% 。小剂量组与对照组相比差异无统计学意义(P 0.05)见表1。 表1 菲牛蛭提取物对家兔体外血栓形成的影响(±s，n=8) 组别 剂量 湿重 湿重抑制率 干重 干重抑制率 TAU （m/mg） (%) (m/mg) (%) 对照组 39.39±5.87 7.91±1.31 大剂量组 1.5 0 ± 0** 100 0 ±0** 100 中剂量组 0.75 25.76±2.67* 34.6 6.01±1.02* 24.3 小剂量组 0.5 36.55±7.90 7.2 7.47±2.29 5.6 注：与对照组相比，**P0.01 * P0.05 2．2 菲牛蛭提取物对大白鼠血栓形成的影响： 与对照组比较，给药组药后5min对大白鼠半体内血栓形成影响不大(P0.05)，药后10、15 m