动物细胞培养生物制药.pdf

第第99讲讲 动物细胞培养生物制药动物细胞培养生物制药II 本节主要内容 1.动物细胞培养的特点 2.动物细胞培养的条件、方式 33.原代培养原代培养、传代培养技术传代培养技术 本节关键问题 问题1：动物细胞体外生长特点 问题2：动物细胞培养的培养基特点 问题问题33：动物细胞原代培养方法动物细胞原代培养方法 问题4：动物细胞传代培养方法 （一）动物细胞培养的特点 1定义：动物细胞培养 （Animal cell culture）是模拟体 内生理环境使分离的动物细胞在体外生存内生理环境使分离的动物细胞在体外生存、、增殖的增殖的一门技门技 术。 2历史： 1907年,哈里森（Harrison）采用盖玻片覆盖凹窝玻璃悬 滴培养法将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中滴培养法将蛙胚的神经组织培养在淋巴液中，存活了几周存活了几周 时间，并观察到细胞突起的生长过程，开创了动物组织培 养的先河。 法国学者卡雷尔法国学者卡雷尔 （（CCarrell））设计的卡氏培养瓶设计的卡氏培养用于年用于 培养鸡胚的心肌组织取得成功，极大推动了动物细胞培养 技术的建立。 1951年，厄尔利（Earle）等人开发了动物细胞体外培养 的培养基。伴随着培养工具与培养基的不断完善，动物细 胞体外培养技术日益成熟胞体外培养技术日益成熟。。 3应用领域 生产药品生产药品：：作为宿主细胞表达生产原核细胞所作为宿主细胞表达生产原核细胞所 不能生产的药用蛋白。 基础研究的基础研究的细胞材料细胞材料：细胞模型细胞模型 种子细胞种子细胞 ：为组织修复与器官再生提供种子细为组织修复与器官再生提供种子细 胞。 4特点 动物细胞比微生物细胞大，无细胞壁，对机械搅 拌或剪切力敏感。 动物细胞动物细胞生长缓慢生长缓慢，易受污染易受污染。 正常细胞培养的世代数有限，只有癌细胞和发生 转化化的细胞胞才能无限生长下去。 动物细胞间主要以聚集体形式存在动物细胞间主要以聚集体形式存在，大多需要大多需要贴贴 附在载体表面才能生长。 体外生长的动物细胞一般具有贴附、细胞接触 性抑制、密度抑制的特点。 悬浮型细胞悬浮型细胞：：与微生物与微生物、、植物细胞不同植物细胞不同，，动物动物 细胞中只有极少数细胞体外生长不必贴壁，可 在培养液中悬浮生长，称之为悬浮型细胞。血 液白细胞、淋巴细胞、某些肿瘤细胞等属于此 类细胞。 贴附型细胞：大多数哺乳动物细胞必须附着在 带适量正电荷的固体或半固体表面才能生长。 属于贴壁依赖性细胞，大致分成以下四型： A 成纤维细胞型细胞 外形与体内成纤维细胞形状相似，细胞大致呈梭形 或不规则形或不规则形。。成群细胞呈现放射状成群细胞呈现放射状、、旋涡状等形式旋涡状等形式 。多数细胞之间排列疏散，有较大的细胞间隙。 B上皮型细胞 类似上皮细胞的细胞类似上皮细胞的细胞，特点是特点是：扁平扁平状状，形态较为形态较为 规则，细胞贴壁后呈三角形及不规则扁平的多角形 ，中央有扁圆形核中央有扁圆形核，生长时彼此生长时彼此紧密紧密连接成单层细连接成单层细 胞。因为相互拥挤而呈现“铺路石状”，局部可以单层 的上皮状的上皮状“膜片组织膜片组织” 。 皮肤的表皮细胞、消化管与呼吸道的上皮细胞、肺 泡上皮细胞泡上皮细胞、消化腺上皮细胞消化腺上皮细胞、血管内皮细胞等血管内皮细胞等。 C游走型细胞 呈散在生长，一般不连成片，胞质常 突起，呈活跃游走或变形运动，方向 不规则。此型细胞不稳定，有时难以 和其他细胞相区别。 D 多形型细胞 多形型细胞是一些形态上不规则的细胞。多形型细 胞不常见，只有某些像神经组织细胞等难以确定其 稳定形态的，才可归于多形细胞。体外培养呈现多 形型细胞的细胞最常见的是神经原和神经胶质