干货,2015肾内科年会资料4.pdf

中华医学会肾脏病学分会2015 年学术年会 口头报告 OR-01 激素敏感、激素抵抗FSGS 肾小球转录本差异表达研究 1 1 1,1 1 1 1 1 1 仝君 , 谢静远 , 吕丹凤 , 潘晓霞 , 任红 , 王伟铭 , 张文 , 陈楠 1. 上海交通大学医学院附属瑞金医院肾脏科 2. 中国科学院植物研究所 目的 局灶节段性肾小球硬化（FSGS）是成人和儿童激素抵抗肾病综合征（SRNS ）中最常见的原 因之一。本研究同时对治疗反应不同的 FSGS 患者进行转录本研究，以期发现 FSGS-SRNS、 FSGS-SSNS 患者特征性的生物学标志物。 方法 入选FSGS-SRNS 患者3 例，FSGS-SSNS 患者6 例。入选经肾脏病理确诊（光镜、电镜、 免疫荧光）、临床表现符合 NS；排除其他遗传性、继发性肾脏病的FSGS 患者。倒置解剖镜下分 离患者肾小球，提取RNA 样品经质检合格后行Microarray 分析，得到的差异表达基因qPCR 验证。 激素抵抗定义为：足量泼尼松［1mg/(kg·d)］治疗8 ～16 周后仍有持续性蛋白尿。 结果 经Microarray 及多重分析发现，与FSGS-SSNS 患者肾小球转录本相比，FSGS-SRNS 患者 肾小球转录本中：894 个基因呈现高表达，主要参与细胞内氨基酸代谢(ALDOB, aldolase B, P ，离 子转运过程(MGAM, maltase-glucoamylase, P ；而2331 个基因呈现低表达，主要参与泛素化过程 ( UTY, ubiquitously transcribed tetratricopeptide repeat gene, P ，核糖体RNA 组成(RN5S353, 5S ribosomal 353, P 等，图1。我们在差异表达的基因中挑选了前六位上调表达的基因，和足细胞特异 基因（NPHS2、TRPC6 ），通过RT-PCR 方法在另外的患者肾小球转录本中进行相关基因的验证， 验证结果显示相关基因的表达趋势与Microarray 结果一致，图2 。 结论 本研究获得激素抵抗FSGS 的肾小球表达谱，为临床治疗评估和药物作用靶标提供新的依据。 OR-02 TGF- β通过Smad2/3 和HDAC3 信号通路下调miR-30d 在诱导足细胞损伤中 的作用 刘琳, 曹望森, 刘志红 南京军区南京总医院 国家肾脏疾病临床医学研究中心 全军肾脏病研究所 210002 目的 FSGS 患者肾小球呈现miR-30 下降，TGF-β 能抑制足细胞中miR-30 的表达并诱导其骨架损 伤及凋亡。本研究旨在阐明TGF-β 下调miR-30 的分子机制，并探索足细胞疾病治疗新靶点。 方法 本研究利用人永生化足细胞及HEK293 细胞进行体外实验。采用qRT-PCR 检测miR-30 mRNA 水平；荧光素酶报告系统检测miR-30d 启动子区活性；染色质免疫共沉淀（ChIP ）检测目的蛋白与 启动子区的结合；免疫共沉淀检测目的蛋白间的相互作用；构建小干扰 RNA (shRNA) 干扰质粒敲 低目的蛋白HDAC3 水平；流式细胞术检测足细胞凋亡。 结果 我们首先验证了TGF-β 能下调miR-30 家族，并且能被去乙酰化酶抑制剂TSA 逆转。生物信 息学分析发现miR-30d 启动子近转录起始区含有数个可能的Smad 结合元件。我们克隆了miR-30d 323 中华医学会肾脏病学分会2015 年学术年会 口头报告 启动子（-1799/+229）并经细胞瞬转实验证实TGF-β 能明显降低 miR-30d 启动子近转录起始位点 含 Smad 结合位点片段(-383/+229) 的活性，表明 TGF-β 通过 Smad 信号通路在转录水平下调 miR-30d。我们还发现该抑制作用能够被TSA 逆转。TGF-