分子生物学（张海红）第十章 遗传重组.pptVIP

RecA引起的链交换和Holliday结构的生成 第二节 位点专一性重组 ? 两大步 a) 共合体形成 切口－连接－复制 b) 拆分 靶位点的DR形成 2、非复制型转座模式 ? 供体上最终产生双链断裂 ? 供体位点如不能被修复则有致 死效应 3、保守型转座模式 ? 另一种非复制型 ? 与λ整合机制相似 其转座酶与λ整合酶家 族有关 4、TnA转座模式 ? 复制型转座 转座酶(tnpA)、 解离酶(tnpR) ? 解离酶需要特异的内 部位点 双重功能：解离功能 tnpA及自身的阻遏物 ? 拆分位点 –res 共合体拆分位点 ? 转座结果产生5bp 的正向重复序列 四、转座子转座频率的调控 ? 每个转座子控制自身转座的核心----控制转座酶的水平 不到一个转座酶分子／世代／细胞 1、Tn10转座机制 ? Tn10为复合型转座子 ? IS10R元件提供转座酶活性-----合成转座酶的序列 ? 自发转座频率---10－7 ? Tn10转座酶水平是控制转座的关键 ? 有两种控制转座的方式 a） 通过反义RNA的翻译水平控制 ? IS10R外侧边缘两个启动子 ? PIN控制IS10R的转录 弱启动子 ? POUT—强启动子 右向转录宿主DNA ? INRNA和OUTRNA 有36bp的重叠 稳定性： OUTRNA??INRNA ? 大量OUTRNA作为 INRNA的反义RNA b） 甲基化作用控制转座酶合成及其与DNA的结合 ? Tn10转座酶启动子含有GATC序列（其它转座子） ? E.coli中Dam甲基化酶 作用使启动子相对钝化 只能利用刚刚复制完成 时出现少数转座酶 ? 此外，IS10R的末端 IR也含有GATC， 甲基化的GATC不能 结合转座酶 ? Tn10在DNA刚刚 复制后发生转座 五、转座子的某些遗传学效应－－P167 第四节 真核生物的转座成分 真核生物的转座成分根据转座机制目前分为两类： a) 转座机制与细菌的转座子类似 遗传信息： DNA→DNA ? 玉米的Ac-Ds元件、果蝇的P元件和FB元件等 b) 转作机制类似逆转录病毒 遗传信息： RNA→DNA→RNA ? 如：逆转录病毒、果蝇的copia元件、酵母的Ty元件 本章结束！！！ 复习题 名词解释 狭义遗传重组 位点专一性重组 转座子 极性突变 Holliday 结构 问答题 1、同源重组的简单过程及Holliday结构形成的分子机制。 2、原核同源重组说涉及的主要酶系及各自在重组中的功能为何 3、 λphage的整合与切除的分子机制（重组涉及的各要素及 简单过程） 4、原核和真核转座子的种类 5、说明Tn10转座频率调控的机制。 6、转座重组的特点。 一、位点专一性重组（ site-specific recombination） 1、概念：发生在专一序列而顺序极少相同的DNA分子间 的重组 噬菌体基因组整合到细菌染色体基因组中属此种重组 2、特征： ? 在特定的结合序列部位，有专一的酶催化断裂重接 ----产生精确的DNA重排 ? 都具有整合作用的两个基本特征 a、 典型的保守性重组---交换是相互的和保存原先的DNA b、 发生在噬菌体和细菌DNA短同源序列的专一性核苷酸上 Euk. 中专一性抗体基因的构建 二、λphage的整合与切除 1、实现机制： 均是通过---细菌DNA和λDNA上特定位点之间的重组 2、特定位点-----附着位点（attachment site att） ? E.coli attB 含BOB’三序列 23bp ? λphage attP 含 POP’三序列 240bp ? 核心序列 “O”完全一致 （同源部分） ---位点特异性重组发生的地方 ? B,B’,P,P’---臂 3、整合过程 ? 整合后的附着位点为 attL（BOP’） attR（POB’） ? 整合位点---attB、attP 切除位点---attL、attR ? 整合过程需要λ整合酶 （integrase Int）（λ编码）