生化药物质量标准中的生物检定及其进展.ppt

生化药物质量标准中的生物检定及其进展 中国药品生物制品检定所 李湛军 生物检定（bioassay ） 一些生化药物质量标准中有生物活性测定 安全性检查 （多组分生化药的原材料来源于人、动物的组织或者体液，或者通过发酵而来。其组分不明确、按照化学药品的质控方式很难控制其质量 ） 多组分生化药注射剂基本技术要求： 涉及到多组分生化药特性的指标应订入质量标准 ，如过敏物质、降压物质、异常毒性等。活性测定也是反映产品质量的重要指标，有时比含量测定更具专属性，建议将活性测定收入标准 生物检定（bioassay ） 按生物体分类：体内测定 (in vivo)---整体动物 体外测定(in vitro)---离体器官、 组织，微生物、酶和细胞 （原代细胞、传代细胞） 中国药典2005版二部中的生物检定 用于生物活性测定的生化药物有21品种 （约占我国生化药的10% ） 安全性检查---很多生化药物 （无菌、微生物限度、热原、细菌内毒素、异常毒性、降压物质、过敏等） 生物检定针对的品种---多组分生化药 对无适当理化方法检定、常规化学测定方法较难建立，不能控制其质量的药品 生物检定是反映产品质量的重要指标，具有专属性 当前英国、美国及中国药典都有收载 生物检定的重要作用 新药研发初始阶段(体外测定筛选有效成分、整体动物试验确认药效) 生产阶段：评价产品批与批之间稳定性和 一致性 生产工艺验证 （生物检定可监测不曾预料、不易发现的 构象变化，它是所有变化的综合效应） 生产工艺验证的品种 DNA重组人生长激素、人胰岛素、人胰高血糖素 ，降钙素等常规检定已用理化测定 （HPLC） 药典（BP、ChP）规定：在研发阶段，生产过程中的产品必须用体内生物测定方法测定其生物效价，直到生产稳定为止 活性测定分类 活性测定---定量：质量标准中生物效价 测定（HCG、HMG、肝素） ---半定量 ---定性 活性测定------半定量 半定量------当理化测定占主导地位，生物效价测定降为辅助作用，只用于活性检查，设定限值，采用半定量方法，不需精确的生物统计，尽可能减少实验动物用量 如治疗二型糖尿病新药重组人胰高血糖素类多肽-1（7-36）质量标准中采用半定量方法（限值为小鼠血糖降低应大于20%）进行活性检查 活性测定------定性 定性（鉴别 Identity）对质量控制能用理化测定的产品，生物测定从主导地位的定量测定降为次要的鉴别项的定性测定，只用较少的动物 例如USP29版：缩宫素（oxytocin）子宫收缩法用于鉴别；升压素（Vasopressin）大鼠血压升高法用于鉴别，效价测定均采用HPLC法 ChP2005版二部缩宫素仍用定量生物测定法 生化药标准中的体内生物检定（1） 生化药标准中的体内生物检定（2） 生化药标准中的体外生物检定（1）离体动物器官、细胞培养、生化酶促反应、免疫学活性等测定法 生化药标准中的体外生物检定（2）离体动物器官、细胞培养、生化酶促反应、免疫学活性等测定法 基因重组技术产品体外生物检定多采用相对快速重复性好的细胞培养测定法，收载 ChP 2005 实验设计与生物统计 生物测定（无论体内、体外 ）的实验误差比理化测定要大 控制实验误差尤为重要 试验控制（良好实验操作、试验材料一致性） 合理的实验设计 运用生物统计 例如肝素含片质量标准 （9th册地标升国标） 内为低分子肝素:LMWH，对FXa效价测定采用体外酶促反应的分光光度法 实验设计为标准曲线法 对其相关系数（r）和每一浓度重复次数均未作要求 本实验室增加要求r 0.98和每一浓度至少重复2次 对同一批号肝素含片产品测定其抗FXa效价，结果误差仍大，重现性差，波动大，缺乏可比性 改为量反应平行线原理的4·4实验设计并结合生物统计 要求实验可靠性测验通过： 直线回归 P0.01， 偏离平行、二次曲线和反向二次曲线P0.05 P 结果较平稳，误差小，重现性好 肝素含片内LMWH不是化学纯品，是一定分子量范围内的多相性成分的分布，其相对分子量、糖链长度、硫酸化数目和位