男性免疫性不育.ppt

男性免疫性不育 1、精液中的抗原 1.1 精浆抗原 1.2 精子抗原 AsAb可存在于血清、精浆、宫颈粘液和精子表面。血清内的AsAb主要是IgG和IgM，精浆和宫颈粘液内主要是IgG和IgA，少数患者有IgE，而精子表面的AsAb主要是吸附的精浆抗体。 （二）诊断的直接指标 1.抗精子抗体检测 检测血清和精浆内的AsAb。 1）直接凝集反应　 A.明胶凝集试验（GAT）： B.试管玻片凝集试验（TSAT）： C.组织配型板凝集试验（TAT）： （1） 凝集反应 2）间接凝集反应　 A.被动血凝试验+Coombs‘试验： B.混合抗球蛋白反应（MAR）： C.免疫珠试验（IBT）： D.免疫洗选法（panning）： 　 精子抗原与AsAb相互作用，激活补体系统，损伤精子细胞膜通透性和完整性，导致精子活动力降低或丧失（可用制动试验测定）和被某些染料着色（用细胞毒试验测定）。 1）精子制动试验（SIT）　 一般采用精子制动值判定结果，近来有采用多次曝光成像法判定结果。目前认为，在诊断免疫性不育时，制动抗体比凝集更有价值。 2）精子细胞毒试验　 较常见的方法是染色法区分死活精子。用台盼蓝染色，或伊红－苯胺黑代替台盼蓝染色。近来有用双乙酰荧光素（DAF）和溴化3，8二氨基5乙基6苯基菲啶（ethidium bromide）两种荧光素分别标记死活精子，测定精子细胞抗体较满意。 （2）补体依赖试验 （3）免疫荧光法 常用间接免疫荧光法。在精子涂片上滴加待测精子后，再加标记荧光素的抗体，然后镜检荧光强度及分布。可进行AsAb定位，敏感性高，但由于精子固定过程中内部抗原暴露，故假阳性率很高。 主要有： ①酶联免疫吸附测定法（ELISA） 可测定血清或精浆的AsAb。先将供精者精子吸附于聚氯乙烯反应板，将待检标本与精子结合，加入酶的底物后，再测定酶的产物反应，可定量。由于反应前精子已固定，因此假阳性和假阴性较高。适用于大批量标本测定。目前已生产出AsAb检测的药盒，检测较为方便。 ②固相酶染色法（SESA） 基本原理同上，但在玻片上进行，可观察精子的着色部位而进行抗体定位测定。 （4）酶标记免疫法 ①固相放射免疫结合测定法（RIBA） 用整个精子或溶解的精子膜，或人工合成精子10肽作抗原，包裹在直径为3 mm的聚苯乙烯珠上，抗原与待测标本（血清等）孵化，加入标记的金黄色葡萄球菌A蛋白，如有AsAb则A蛋白与精子AsAb复合物中AsAb 段结合，测定复合物的放射性强度即可计算AsAb含量。 ②标记兔抗人球蛋白的双抗体法 原理相似于抗球蛋白试验。 A.直接法：将待测精子直接与标记的抗人Ig反应，测定放射性强度可直接测定精子表面的AsAb含量。 B.间接法：先将待测血清或精浆与供精混合，再与标记的抗人Ig结合而测定AsAb含量。此类方法灵敏度很高，可准确定量，但操作较繁琐，费用昂贵。 （5）放射免疫分析（RIA） 　 采用该法测定抗精子多肽抗体。先用SDSPAGE提取７种精子多肽，将多肽转移至醋酸纤维膜，滴加不同稀释度的待测血清，然后浸入碱性磷酸酶标记的兔抗人IgG，取出后再浸入乙胺醇对硝基苯磷酸盐溶液，最后取出醋酸纤维膜，用扫描仪测定并计算蛋白含量，由此推算抗精子多肽抗体的量。此法可检出用精子凝集试验无法测出的抗精子的多肽抗体。 （6）免疫印迹法（immunoblotting） （1）白细胞移动抑制试验　 被精子抗原致敏的淋巴细胞，在被精子抗原激活时，可释放出可溶性的淋巴因子使白细胞移动速度减慢。该法可作为测定精子抗原的细胞免疫方法，可用作免疫不育症的辅助诊断手段。 （2）白细胞粘附抑制试验　 正常人外周血液中的白细胞，在一定条件下，能粘附于清洁的玻璃表面。在精子抗原作用后，被致敏淋巴细胞的粘附能力明显下降，出现粘附抑制现象。免疫性不育症患者粘附抑制指数升高。 2. 细胞免疫功能检测 * * 从免疫学观点来看，凡胶体大分子，分子量超过10kDa，表面具有一定化学结构，尤其是含苯环结构的氨基酸且是异种、同种异体或结构改变的自身远隔成分的自体蛋白质，均可成为抗原。精液由精子和精浆组成。精子和精浆均含有大量的蛋白质，因而这两部分含有多种抗原。 目前已知精浆含有数十种抗原，其中大多数可以在血清中测出，如前白蛋白、白蛋白、球蛋白、转铁蛋白、非特异性脂酶A和B、IgG、IgA、和IgM。 另外，乳铁蛋白、PAS阳性蛋白、亮氨酸氨肽酶、蛋白水解酶、碱性磷酸酶、透明质酸酶、顶体蛋白酶、LDHX以及蛋白水解酶抑制剂等均有抗原性，这些抗原可能来源于生殖道腺体分泌物。 这些抗原中，有些与其他组织发生交叉，如乳铁蛋