- 1、本文档共12页,可阅读全部内容。
- 2、有哪些信誉好的足球投注网站(book118)网站文档一经付费(服务费),不意味着购买了该文档的版权,仅供个人/单位学习、研究之用,不得用于商业用途,未经授权,严禁复制、发行、汇编、翻译或者网络传播等,侵权必究。
- 3、本站所有内容均由合作方或网友上传,本站不对文档的完整性、权威性及其观点立场正确性做任何保证或承诺!文档内容仅供研究参考,付费前请自行鉴别。如您付费,意味着您自己接受本站规则且自行承担风险,本站不退款、不进行额外附加服务;查看《如何避免下载的几个坑》。如果您已付费下载过本站文档,您可以点击 这里二次下载。
- 4、如文档侵犯商业秘密、侵犯著作权、侵犯人身权等,请点击“版权申诉”(推荐),也可以打举报电话:400-050-0827(电话支持时间:9:00-18:30)。
查看更多
浅析细胞体外培养的影响因素及防控策略
摘要
动物细胞培养是现代生物科学中发展十分迅速的一种实验技术。近年来,动物细胞培养技术已从单纯的实验操作扩展到生命科学、生物医药学等多个学科的研究和生产领域,成为广泛采用的技术手段,许多生物技术科学研究都离不开细胞培养。本文从细胞培养的基本操作方法入手,介绍了动物细胞体外培养的主要影响因素,以及对细胞实验室无菌环境的防控策略。
关键词:细胞体外培养;影响因素;无菌环境;防控策略目 录
摘要 I
1引言 1
2基础理论概述 1
2.1细胞培养的概念 1
2.2原代细胞培养的概念 1
2.3传代细胞培养 2
3影响细胞体外培养的因素 2
3.1细胞分离方法 2
3.1.1直接分离法 3
3.1.2酶消化法 3
3.2细胞培养温度 3
3.3细胞培养基的成分 3
3.3.1天然培养基 3
3.3.2合成培养基 3
3.4接种密度 4
3.5培养基的pH值 4
3.6细胞的冻存与复苏 4
3.6.1细胞冻存 4
3.6.2细胞复苏 5
4 细胞实验室无菌环境的防控策略 5
4.1无菌室的彻底消毒 5
4.2培养用品的清洗和消毒灭菌 6
4.2.1清洗 6
4.2.2消毒灭菌 6
4.3培养试剂的分装与保存 7
4.4对操作者的要求 7
5 结语 8
参考文献 9
致谢 10
浅析细胞体外培养的影响因素及防控策略
1引言
细胞体外培养技术由于具有简化细胞生长环境、明确生长条件、便于施加实验因素、容易获得活体直接观测实验结果,以及方便控制培养产物等优点,在医药领域已成为研究发病机理和筛选药物的重要手段,在分子生物学领域,利用细胞培养技术,结合细胞融合、细胞杂交以及转基因技术,进行基因重组、组织构建,成为分子遗传和组织工程研究者的重要研究工具,利用细胞培养生产具有重要医用价值的酶、生长因子、疫苗和单抗等,已成为医药生物技术产业的重要部分。
近年来,分子生物学和分子遗传学获得巨大进展,培养细胞技术被广泛应用于该领域的研究,这些培养的细胞已成为基因工程、遗传工程、体细胞克隆、转基因动物、生物制药、干细胞、微生物学、细胞生物学、遗传学、病毒学、免疫学等学科研究的有力工具和重要途径。
2基础理论概述
2.1细胞培养的概念
细胞培养是指将细胞从机体中取出,人工模拟机体内生理条件,在无菌、适当温度和一定营养条件下,使其生存、生长、繁殖和传代,进行细胞生命过程、细胞癌变、细胞工程等的研究工作,是维持细胞结构和功能的体外培养方法。
2.2原代细胞培养的概念
原代培养是指取自体内新鲜组织并置于体外条件下生长的细胞在传代之前称为原代培养,这是细胞培养的最初和必经阶段。培养方法包括:单层细胞培养和悬浮培养。
单层细胞培养:将取下的组织块无菌剪切后,用0.25%胰酶消化,使细胞分离,再用无菌Hanks液或0.85%NaCl溶液洗涤后,置培养皿或培养瓶中培养。
悬浮培养:悬浮培养的细胞多取材于血液或体腔液,一般采用离心法分离细胞,低速500-1000r/min,离心5-10min即可。培养时,只要取适当浓度的细胞悬液接种于完全培养液中,细胞就能增殖。
2.3传代细胞培养
传代细胞培养是指细胞在培养器皿中生长一定时间后,被分开接种到新的培养器皿中,即当原代培养细胞生长到一定时期,受到群体环境限制,就需要转移到另一容器才能继续生长,称为传代或继代培养。根据原代培养物性状的一致性与否,传代成功后称为细胞系或细胞株。这些细胞一般可顺利传40-50代次,并保持染色体二倍体数量和接触抑制,传至50代左右时则出现生长停滞,大部分衰老死亡,此类称为有限细胞系/株。一般细胞原代培养1-4周后,需要进行分离培养,否则细胞会因生存空间不足或由于细胞密度过大引起营养枯竭,影响细胞的生长繁殖。
在细胞传代的过程中,有些因发生遗传突变获得了持久性增殖能力的细胞称为无限细胞系/株。传代次数与物种寿命有关:小鼠寿命3年,传代12次;龟寿命200年,传代140次。人传代次数与个体年龄成反比:人胚胎40-60代;幼年20-40代;成年10-30代;得了早老病的儿童2-10代。传代培养的方式主要有:贴壁型细胞传代和悬浮型细胞传代。
(1)贴壁型细胞传代:传代时需要用胰酶将细胞消化,使其从支持物上脱落,或用EDTA溶液与胰酶按体积比为1:1或1:2比例混合后联合使用。过滤除菌后小量分装,于-20℃保存。消化时吸去培养瓶内的培养液,加入适量的EDTA溶液与胰酶的混合液,以能覆盖细胞层为宜,将培养瓶平放,37℃作用3-5min,加入Hanks液,1000r/min离心5min即可除去消化液,洗1-2次后加入完全培养液,计数,置培养皿或培养瓶中培养。
(2)悬浮型细胞传代:传代时用吸管将细胞吹打均匀,特别是一些成团生长的细胞,应将细胞团块打散。根据细胞生长状况的不同,用吸管将细胞悬液吸去适当的量,然后再
文档评论(0)