论文：林蛙致病菌的分离及鉴定.doc

PAGE PAGE 3 项目编号： 项目编号： KFJJ- 大学生开放性实验基金项目 申 请 书 项目名称：林蛙致病菌的分离及鉴定 申 请 人：董 青 所在院系：生命科学学院 指导教师：李 治 联系电话申报时间：2008年6月 填 表 须 知 一、《陕西师范大学大学生开放性实验基金项目申请表》要按顺序逐项填写，内容要实事求是，表达要明确、严谨。空缺项要填“无”。要求一律用A4纸打印，于左侧装订成册。 二、申请参加陕西师范大学大学生开放性实验基金项目团队人数不得超过5人（1人为项目负责人，项目参与者1--4人）。 三、《陕西师范大学大学生开放性实验基金项目申请表》由申报学生所在学院初审，签署意见后，一式三份（均为原件），报送实验室建设与管理处。 四、如填表有不明事宜，请与实验室建设与管理处联系和咨询。（联系电话 一、基本情况 项目名称 林蛙致病菌的分离及鉴定 项目来源 □自拟课题 □综合设计 □科学研究 □计算机应用 □人文素质 起止时间 2008年6月至2009年6月 申请人姓名 学院、专业、年级 学号 项目中的分工 联系电话 签 名 负责人 董 青 生科院05级生物科学2班参与所有实验内容项目 参加 人 廖小玉 生科院06级生物基地班参与所有实验内容任 烨 生科院06级生物基地班参与所有实验内容指导教师 姓名 学院 职称 研究方向 联系电话 签 名 李治 生科院 副教授 分子微生物学项目所依托的实验室 分子微生物学实验室 摘要（不超过300字）： 两栖动物皮肤裸露、渗透性好，对环境的改变极其敏感；而且两栖动物对水体环境和陆地环境都比较敏感，所以两栖动物一直被作为生态环境监测的重要指示类群，两栖动物种群及数量的减少可以说明环境的恶化。中国林蛙为国家二级保护动物，但是其野生资源日益减少。因而研究野生中国林蛙种群数目减少原因，对于探讨全球变化对生态系统的影响、保护物种多样性、保护人类生存环境等问题均有一定指导意义。 根据我们调查，秦岭山麓分布的野生中国林蛙近年来发生大面积死亡。因此本研究拟对染病的野生中国林蛙的致病菌进行了分离鉴定，分析其患病及死亡原因，旨在为更好地保护中国林蛙、保护物种多样性提供理论依据。 二、申请书正文 1、立项依据（研究项目的意义、国内外研究现状、和发展动态） 随着人类活动范围的不断扩大，全球很多生态系统正在不断恶化。生态环境的恶化使野生种群以1000倍于自然绝灭的速度在消失，对生物的多样性造成了重大威胁，特别是两栖类。与其他野生动物相比，两栖动物分布广泛，与自然环境中众多生态因子有密切关系。两栖动物的卵没有壳和羊膜覆盖，同时其皮肤裸露、渗透性好，使两栖类对环境的改变极其敏感；两栖动物生活史既包括水体生活阶段又包括陆地生活阶段，因此对水体环境和陆地环境都比较敏感。所以两栖动物一直被作为生态环境监测的重要指示类群，两栖动物种群及数量的减少说明环境发生了改变。导致两栖类种群及数量下降的原因可能有：紫外线辐射、生境破碎和改变、生物入侵和捕食、环境污染、病菌感染、气候变化、人为的过度捕捉以及这些因素的相互作用。 中国林蛙(Rana chensinensis) 属两栖纲无尾目蛙科蛙属，为国家二级保护动物。由于过量捕捉和自然环境的严重破坏，中国林蛙野生资源日益减少，已被列入《中国濒危动物红皮书》，为易危(V)物种。因而研究其种群数目减少原因，对于探讨全球变化对生态系统的影响、保护物种多样性、保护人类生存环境等问题均有一定的指导意义。目前对中国林蛙的研究集中于发育生物学方面，包括研究pH、酸碱度、温度等对中国林蛙发育的影响。也有研究者关注于养殖林蛙的病菌感染，例如对蛙红腿病致病菌的分离鉴定及其防制进行研究，然而对野生中国林蛙病菌感染方面的研究还未见报道。本研究对染病的野生中国林蛙的致病菌进行了分离鉴定，旨在为更好地保护物种的多样性、保护中国林蛙提供理论依据。 2、项目的主要内容和创新点、拟解决的关键问题 主要内容： 本研究从患病的野生中国林蛙体内分离潜在的致病菌，并运用16S rDNA技术对分离到的菌株进行分类鉴定。 创新点： 常规的菌种鉴定方法主要是从微生物的形态特征、生理生化特征、免疫学特征进行鉴定，但这些传统方法繁琐耗时、准确性较低。而运用16S rDNA序列分析技术对菌株进行鉴定的方法具有高效、准确、简便、特异性强的优点。同时，微生物16S rDNA序列数据库不断扩大。运用16SrDNA序列分析技术对微生物进行分类鉴定，确定微生物在进化中的位置，已成为微生物分类学中最重要的方法。本研究首次