食品添加剂维生素B2的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验.doc

食品添加剂的质量规格要求、生产使用工艺和检验方法，食品中该添加剂的检验方法或者相关情况说明 1 维生素B2的质量规格要求 质量规格要求符合日本《食品添加剂公定书》中维生素B2的相关要求： 项目 规格 性状 符合《食品添加物公定书》 确认试验 符合 注1 纯度试验（1）：-128.0～142.0°（2） 注3 干燥减量 1.5% 注4 灼烧残渣 0.30% 注5 含量 98.0～102.0% 本品水溶液（1100,000），呈淡黄绿色，发强烈的带黄绿色的荧光，如果加入盐酸（14）或氢氧化钠溶液（125）后此荧光会消失。 【注2】纯度试验·比旋光度：干燥本品精密称取0.1g，加入氢氧化钾溶液（1150）4ml使之溶解，再加入新煮沸又冷却后的水10ml，一边加入乙醇4ml一边充分振荡溶液，再加入新煮沸又冷却后的水定容至20ml，30分钟内测定比旋光度。【注】纯度试验·称取本品0.025g，加入无醇三氯甲烷10ml，振荡5分钟，滤过，其滤液的颜色不比以1/60mol/L重铬酸钾溶液3.0ml加水配成的1000ml溶液的颜色深。【注】干燥减量：1.5%以下（105℃，2小时）【注】【注】本品干燥后，含有核黄素（C17H20N4O6）98.0～102.0%。将干燥后，精密称取0.015g，加入乙酸（1400）800ml，加温溶解，冷却后，加水定容至1000ml，以此作为检测溶液。另外称取核黄素标准品，采用与上述检测溶液同样的操作，制成标准溶液。对于检测溶液与标准溶液，以水作对照溶液，在波长445nm测定它们的吸光度A和A。在上述检测溶液与标准溶液5ml中分别加入连二亚硫酸钠（Na2O4S2）0.02g，振动摇匀后使之脱色后，马上测定吸光度AT’和As’，按以下公式求得添加剂维生素B2核黄素含量。 以上操作需避免直射阳光，在遮光容器里进行。 核黄素（C17H20N4O6）含量＝高效液相色谱法＊1（公定法） 4.1 仪器和试剂 附带荧光检测器的高效液相色谱仪（HPLC（FL）） 色谱柱反相分配型，内径4.6mm，长度150mm 标准维生素B：日本药典标准品「核黄素标准品」（日本公定书协会） 4.1.酶溶液：取维生素B定量用高峰淀粉酶B0.5g，在临用时溶于10ml醋酸缓冲液(pH4.5)中，过滤或离心分离后使用其上清液。 合成沸石：活性吸附剂，吸附维生素B定量用 4.1. 25w/v%氯化钾?0.1mol/l盐酸溶液(洗脱液)：加入8.5ml浓盐酸至1L25w/v%氯化钾溶液中。 4.1. 其他试剂若无特别说明,均使用色谱纯。 4.1. 玻璃容器选用褐色的玻璃容器。4.2 试验溶液的配制精密量取样品(1～10g)放入100ml提取瓶中加入0.1mol/l盐酸50ml,沸水浴中加热30分钟时而搅拌进行提取.在50℃以下冷却用4mol/l醋酸钠溶液调整pH值至4.0～4.5添加5ml酶溶液在37℃下保温一晚后加入醋酸缓冲液(pH4.5)定容至100ml过滤后的滤液作为样品溶液＊2精确注入适量的样品溶液(含1～5μg维生素B)至已用水填充了活性合成沸石(1.5g)的吸附柱中以1ml/min的流速让其吸附用5ml水冲洗吸附管内壁,然后用30～60ml沸水清洗色谱柱后,用沸腾的洗脱液以1秒1滴(3ml/min)的流速洗脱分取大约25ml的溶出液降到室温后,用洗脱液定容至25ml作为HPLC用试验溶液配制标准溶液 标准原液核黄素标准品于105下干燥2小时，干燥器内冷却30分钟后，精确称取50mg至1L褐色容量瓶内。加入4ml醋酸和约700ml温水，用超声波溶解。冷却后，用水定容（50μg/ml，在阴冷却处放置6个月稳定，每6个月配制一次）。 标准溶液精确量取4ml标准原液至200ml褐色容量瓶内，用醋酸缓冲液(pH4.5)定容（1μg/ml，临用时配制）。 HPLC用标准溶液将标准溶液用醋酸缓冲液(pH4.5)稀释，配制成0.1、0.05及0.02μg/ml HPLC用标准溶液。 测定 将试验溶液20μl注入高效液相色谱仪，测定维生素B2的峰值，根据预先从将20μl HPLC用标准溶液注入高效液相色谱仪后得到的标准曲线，求得试样中维生素B2的含量。 （HPLC操作条件）＊3 　色谱柱：内径4.6mm，长度150mm、不锈钢制＊4 　流动相：醋酸缓冲液(pH4.5)?甲醇（6535 v/v） 　检测器：荧光分光光度计 　检测波长：激发波长445mm、荧光波长530mm 　流 速：1.0ml/min 　柱 温：35计算 试液中维生素B2的含量（mg/100g）＝C×V×N×100/W×10-3 　　C：根据标准曲线求得维生素B2的浓度（μg/ml） 　　V：定容量（ml） 　　N：稀释率 　　W：试样采取量（g） ※1. 虽然也有不进行酶