流感灭活疫苗.doc

流感全病毒灭活疫苗 Liugan Quanbingdu Miehuo Yimiao Influenza Vaccine (Whole Virion, Inactivated) 本品系用世界卫生组织（WHO）推荐的并经国家药品管理部门批准的流感病毒株分别接种鸡胚，经培养、收获病毒液、灭活病毒、浓缩和纯化制成，用于预防本型病毒引起的流行性感冒。 1基本要求 生产和检定用设施、原材料及辅料、水、器具、动物应符合“凡例”有关要求。 2制造 2.1 生产用鸡胚 毒种传代和制备用鸡胚应来源于SPF鸡群；疫苗生产用鸡胚应来源于封闭式房舍内饲养的健康鸡群， 并选用9～11日龄无畸形、血管清晰、活动的鸡胚。 2.2 毒种 2.2.1 名称和来源 生产用毒种为WHO推荐的甲型和乙型流行性感冒病毒株，经检定证明为WHO当年推荐的病毒株或相似株。 2.2.2种子批的建立 应符合“生物制品生产和检定用菌毒种管理规程”规定。以WHO推荐并提供的流感毒株代次为基础，传代建立主种子批和工作种子批，至成品疫苗病毒总传代不得超过5代。 2.2.3 种子批检定 主种子批应进行以下全面检定，工作种子批应至少进行2.2.3.1-2.2.3.5项检定。 2.2.3.1 鉴别试验 血凝素型别鉴定：应用相应（亚）型特异免疫血清进行血凝抑制试验或单向免疫扩散试验，结果应证明其抗原性与推荐的病毒株相一致。 2.2.3.2病毒滴度 应用鸡胚半数感染剂量法（EID50）检查，病毒滴度应不低于6.5LgEID50/ml。 2.2.3.3 血凝滴度 采用血凝法检测，血凝效价应不低于1:160。 2.2.3.4 无菌检查 依法检查（附录XII A）， 应符合规定。 2.2.3.5 支原体检查 依法检查（附录XII B）， 应符合规定。 2.2.3.6 外源性禽白血病病毒检测 用相应（亚）型的流感病毒特异免疫血清中和毒种后，接种SPF鸡胚细胞，经培养，用酶联免疫法检测培养物，结果应为阴性。 2.2.3.7 外源性禽腺病毒检测 用相应（亚）型流感病毒特异免疫血清中和毒种后，接种SPF鸡胚肝细胞，经培养，分别用适宜的血清学方法检测其培养物中的Ⅰ型和Ⅲ型禽腺病毒，结果均应为阴性。 2.2.4 毒种保存 冻干毒种应置-20℃以下保存，液体毒种应于-60℃以下保存。 2.3 单价病毒原液 2.3.1 病毒接种和培养 于鸡胚尿囊腔接种经适当稀释的工作种子批毒种后，置33～35℃培养48～72小时。一次未使用完的工作种子批毒种，不得再回冻继续使用。 2．3．2 病毒收获 筛选活鸡胚，置2～8℃一定时间冷胚后，收获尿囊液于容器内。逐容器取样进行尿囊收获液检定。 2.3.3 尿囊收获液检定 2.3.3.1 微生物限度检查 菌数应小于105CFU/ml，沙门氏菌检测应为阴性（附录XII G）。 2.3.3.2 血凝滴度 按2.2.3.3项进行， 应不低于1：160。 2.3.4 尿囊收获液合并 每个容器的单型流感病毒的尿囊液检定合格后可合并为单价病毒合并液。 2.3.5 病毒灭活 在定的蛋白质含量范围内进行病毒灭活。 单价病毒合并液中加入终浓度不高于0.2mg/ml的甲醛， 置适宜的温度下进行病毒灭活， 病毒灭活到期后， 每个病毒灭活容器应立即取样，分别进行病毒灭活验证试验， 并进行细菌内毒素含量测定。（也可在纯化后或纯化过程中加入适宜浓度的甲醛溶液进行病毒灭活）。 2.3.6 浓缩和纯化 2.3.6.1超滤浓缩 采用离心或其他适宜的方法， 将单价病毒合并液进行澄清，采用超滤法将病毒液浓缩至适宜蛋白质含量范围。。超滤浓缩后病毒液应取样进行细菌内毒素含量测定。 2.3.6.2 纯化 超滤浓缩后的病毒液可采用柱色谱法或蔗糖密度区带离心法进行纯化，采用蔗糖密度区带离心法进行纯化的应用超滤法去除蔗糖，超滤后的病毒液取样进行细菌内毒素含量测定和微生物限度检查， 微生物限度检查菌数应小于10CFU/ml。 2.3.7 除菌过滤 纯化后的病毒液经除菌过滤，并加入适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂， 即为单价病毒原液。 2.3．8单价病毒原液检定 按3.1项进行。 2．3．9保存 应置2～8℃保存。 2.4半成品 2.4.1 配制 根据各单价病毒原液血凝素含量，将各型流感病毒按同一血凝素含量进行半成品配制， （血凝素配制量可在30-36ug/ml范围内， 每年各型别流感病毒株应按同一血凝素含量进行配制）， 可加适宜浓度的硫柳汞作为防腐剂， 即为半成品。 2.4．2 半成品检定 按3.2项进行。 2．5 成品 2.5．1 分批 应符合“生物制品分批规程”规定。 2.5．2 分装 应符合“生物制品分装和冻干规程”规定。 2.5.3 规格 每瓶0.5ml、1.0ml，每1次人用剂量为0.5ml、1.0ml，含各流感病毒株血凝素应为