灭菌工艺及设备验证.ppt

如果在灭菌前产品中没有耐热菌， 可假设有一定数量的芽胞存在于其中(常规生产时可能会碰到的最差状况)。如设每只容器内含有 D121℃=0. 5分钟的耐热芽胞100个。 根据与假设菌的数量及耐热性相当的实际生物指示剂(BI)来确定一个灭菌工艺的灭菌效果。 根据置于灭菌产品内的测温探头的测量数据计算出理论F0值，并对多次运行的F0值进行平均，将平均F0值与从接有生物指示剂(已知胞子数量和D值)的类似容器中得到的平均SLR(spore log reduction)值进行比较。 残存概率法 根据生物指示剂的致死效果，估算出实际污染菌的下降水平: SLR A=SLRB × DB/DA SLR A灭菌前产品中污染菌的对数下降值 SLR B生物指示剂的对数下降值 DA灭菌前微生物的(已知或假定的)D值 DB生物指示剂D值。 如果DA=0.5分钟，DB=2.0分钟， 121℃ F0=8分钟，SLRB= 4， 则:SLR A=16, SLRA=4× (2.0/0.5)=16 lgNT =1gN0-SLR =2-16=-14, SAL=14。 残存概率法 在灭菌结束时仍有一部分生物指示剂未被杀灭，但这并不意味着此灭菌程序无效。通过它们，证实了测温探头指示的F0值（8分钟)所赋予容器内物品的实际灭菌效果。 残存概率法 只要对灭菌前的含菌量进行控制、监测并掌握其耐热性，一般是不会含有耐热芽胞的 控制手段 对每批的灌封开始和结束阶段，分别对灌装好的半成品取样检测。 样品须作需氧菌总计数 将检品液置于100℃下加热10分钟，检查是否有耐热芽孢存活 须对微生物学检测结果进行趋势分析以确保半成品的微生物处于稳定的受控状态 残存概率法 一般情况下，暴热后的样品中是检测不到微生物的，一旦发现，则需对其鉴别并测定其D值。 若分离菌的D值大于灭菌工艺验证所用生物指示剂的D值，则说明灭菌程序不充分，应采取措施以消除产品中的耐热菌。 如果这些措施不可行，则应采用具有更强耐热性的生物指示剂，或是从产品中分离出的耐热性微生物，对灭菌程序进行再验证。 生物学验证就是要用与产品灭菌工艺相适应的最苛刻条件来挑战该产品灭菌工艺的有效性、可靠性和稳定性。 过度杀灭法：一般选择嗜热脂肪芽孢杆菌 。 残存概率法：一般选择梭状芽孢杆菌 液体产品在121℃灭菌15分钟(药典推荐的常用灭菌工艺)即被认为过热灭菌工艺。 对管路、胶塞、织物以及过滤器等热穿透性较差的物品则需要更长的灭菌时间或更高的灭菌温度，方能达到过热灭菌要求（ 121℃灭菌30分钟）。 每个指示剂的芽胞含量通常在105-107之间 生物指示剂有效性 当F0值≤ (D×lgN0-2)时，生物指示剂均应呈阳性结果 当F0值≥ (D×lgN0+4)时，生物指示剂均应呈阴性结果 生物指示剂 要掌握灭菌前产品中污染菌状况， 污染菌的数量及其耐热性; 测定生物剂在待验证产品及验证用标准溶液中的耐热性(D值和Z值); 根据产品的最低灭菌工艺条件、灭菌前产品中的污染菌控制要求及最终产品的无菌保证要求，用相关公式计算出验证时每个生物指示剂所需要的胞子数量。 生物指示剂 F0（分钟） 7 6 5 4 3 2 1 0 -1 -2 -3 -4 -5 -6 孢子存活数量的对数值 t logN0 = F0/D121 +logNt Nt = 2.303 ×log(n/q) n:每次挑战试验用生物指示剂数量 q:挑战试验后呈阴性的BI数量 如果全都是阴性,则假定 q = n-1用于计算 Nt 产品 灭菌前含菌量 控制限度CFU/瓶 耐热性 DC ≤ DBI 温度×时间 F0控制范围） 验证用孢子在其 中的耐热性D121 A ≤100 116℃×25 9 -13 0.8 分 B ≤100 DC ≤ DBI 116℃×25 8 - 12 0.9 分 C ≤100 DC ≤ DBI 118℃×20 9 –13 0.7 分 可选择产品B代表上述三产品进行验证 产品的规格相同、且在同一灭菌设备内灭菌并且灭菌工艺条件相似、以及生物指示剂芽胞在其中的耐热性也较为相近，只要验证其中的一个产品B即可， 生物指示剂在其中的耐热性最高，而灭菌程序的F0值的下限低于其它二产品 但验证时要以100CFU/瓶作为污染菌含量 通过试验证明灭菌程序能使生物指示剂至少下降 8个对数单位, 所需F0为 D121 ×⊿log = 7.2分 最低F0满足要求 确定验证用芽孢在每瓶产品B中的接种数量 验证标准溶液为氯化钠一磷酸盐缓冲液(PBS)，验证试验瓶数量为20袋/次。，产芽胞梭状菌芽胞在氯化钠一磷酸盐缓冲液(PBS, pH7.0)中的