白粉病抗感性之检定方法.doc

白粉病抗感性之檢定方法 一、 接種原及其保存方式 2001-2005年自試驗田取樣2-5片出現白粉病病斑之甜瓜葉片，於解剖顯微鏡下挑取單一孢子沾黏於上述製備妥的葉圓盤上（IRAN-H品種），進行單孢培養，確保純化菌株，於24/18℃（日夜溫）光照12小時的條件下培養12-14天，即有大量分生孢子，將每個純化培養之菌株以上述葉圓盤接種法，以每平方公分50～100個孢子濃度，將分生孢子吹落於盛有8種甜瓜鑑別品種葉圓盤之培養皿內，鑑別品種分別為IRAN-H、Vedrantais、PMR 45、WMR 29、Edisto 47、PI 414723、PMR 5及MR-1，經鑑定為生理小種1（Podosphaera xanthii race1）之葉片圓盤於16℃定溫箱自然乾燥4天後，密封於2.5ml之玻璃安瓶中，於-25℃之冷凍櫃或液態氮容器內保存。 二、 接種方式及抗感性反應之鑑定 將欲鑑定之甜瓜品種種植於盛有泥炭土（Bio-mix）之五吋塑膠盆），置於28℃／22℃（Day／night）光照12小時之生長箱中栽培4-6週，取植株之中上位展開葉以自來水洗淨，再經消毒水（1%次氯酸鈉，並於200ml消毒水加入數滴Tween-20界面活性劑攪拌）表面消毒1分鐘，無菌水漂洗三次，吸乾游離水，再以經高溫滅菌後之金屬圓柱器具切取直徑1.5cm葉片圓盤，正面朝上，置於盛有二層濾紙之塑膠培養皿內。將上述盛有葉片圓盤之密盒或培養皿經人工接種白粉病菌（Podosphaera xanthii race1），每平方公分50～100個孢子濃度，容器加蓋密封置於24℃／18℃（Day／night）光照12小時之定溫箱中，培養10天後記錄發病指數。發病指數分為0?9共10級：0級－無病斑；1級－病斑佔葉面積10%；3級－病斑佔葉面積50%；5級－病斑佔葉面積80%；7級－病斑佔葉面積100%但孢子量稀薄；9級－病斑佔葉面積100%而孢子量厚實且葉片圓盤褐化。發病指數＜1為抗病，發病指數1～3為中感，發病指數＞3則為感病（Floris Alvaeez 1995）。 　 6） 　 7） 　 29） 　 30） 　 　 42） 　 43） 　 49） 　 55） 　 66）