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Code No. RR176 研究用 TaKaRa 16S rDNA Bacterial Identification PCR Kit 说明书 v201702Da 目 录 内 容 页 码 ● 制品说明 1 ● 制品内容 1 ● 保存温度 1 ● 注意事项 2 ● 操作方法 2 ● 实验例 3 ● 其他说明 4 ● Takara 鉴定菌种一览表 4 ● 参考文献 4 ● 制品说明 本试剂盒是PCR扩增细菌16S rDNA的试剂盒，通过进一步对PCR扩增的DNA片段进行序列分析，可以鉴 定被检测细菌种类。细菌的rRNA是细胞内含量最多的RNA，约占RNA总量的80%以上，其分子量大，种 类多，由高度保守区和可变区组成。细菌的rRNA包括5S、16S、23S，其中5S rRNA信息量少，不适合 分析。23S rRNA尽管分子大，信息量多，但碱基突变速度较快，同样不适用于细菌鉴定。相比之下16S rRNA 的遗传较为稳定，长度在1550±200 bp左右，代表信息量适中，是研究系统进化的好材料。目前已经报 道了10,000种以上的细菌16S rDNA序列。通过对16S rDNA的序列分析，可以将细菌划分到属或种。 16S rDNA可以通过PCR法扩增获得，由于16S rDNA的两端较为保守，可以在这保守区域设计引物，扩 增鉴定细菌的16S rRNA基因，然后进行DNA测序，再将其DNA序列与GenBank中的已知序列进行同源性 比较后，可以判定检测细菌种类。 本试剂盒中包含了进行细菌16S rDNA PCR扩增的所有试剂，同时还提供了三条测序用引物（正向测序 引物Seq forward、反向测序引物Seq reverse、中间测序引物Seq internal）。PCR扩增引物可以扩增细 菌rDNA前500 bp的DNA片段（Forward primer/ Reverse primer1），以及全序列的DNA片段（Forward primer/ Reverse primer2）。16S rDNA的前500 bp序列变化较大，包含有丰富的细菌种属的特异性信 息，进行DNA测序时一个测序反应即可测通，是一种较为经济便捷的16S rDNA鉴定方法；如果前500 bp 序列不足以反映细菌的种属信息时，则可以进行16S rDNA的全序列PCR扩增及DNA测序，得到较为全面 的16S rDNA序列信息。 对于难以培养细菌、生化反应不明显及传统表型方法不能鉴定的细菌，使用本试剂盒鉴定未知细菌种类尤 为方便。 ● 制品内容 PCR