HPLC色谱样品预处理.ppt

HPLC色谱样品预处理 一、概述 HPLC已成为当今分析化学领域应用最广泛的一种分析测试手段，应用范围涉及医药、环保、生命科学、石油化工等几乎所有基础和研究领域。由于HPLC常常用于各种复杂的基体以及低含量组分的分析，因此，对样品进行前处理变得非常重要。 二、样品处理的目的 将待测物质有效地从样品基质中释放出来 出去杂质，纯化样品，使得色谱柱的分辨率和使用寿命得到保护 富集浓缩样品或进行衍生化 使样品的形式及所用溶剂符合HPLC的要求。 三、样品处理的原则 分析样品制备过程中尽可能防止和避免与测定组分发生化学变化或者丢失； 在样品处理过程中，如果将欲测定组分进行化学反应，那么这一反应必须是已知的，而且可以定量的完成； 在分析样品制备过程中，要防止和避免欲测定组分被玷污，尽可能减少无关化合物引入制备过程； 样品的处理过程应当尽可能简单易行，所采用样品处理装置的尺寸应当与处理的样品量相适应 在采样之后应当尽可能快的进行样品的分析测定，或者使用合适的方法消除这些可能的变化和干扰。 四、常用的样品预处理的技术 过滤、离心 溶剂萃取 固相萃取 微萃取 衍生化 免疫亲和 4.1 过滤、离心 用于液相色谱分析的样品溶液必须均匀而无颗粒，有颗粒会损坏进样器并堵塞柱头。 HPLC常用的滤膜孔径为滤膜的成分为纤维素、聚四氟乙烯或聚酰胺，聚酰胺应用最广，它是亲水材料，适合于水溶液的滤过，也不被HPLC常用溶剂所腐蚀，不含添加剂，不会将杂质带进样品中。 4.2 溶剂萃取 液一液萃取、液一固萃取、液一气萃取、超临界流体萃取（SFE）、加速溶剂萃取（ASE） 4.2.1 经典萃取方法 液-液萃、液-固萃取-、液气萃取 加速溶剂萃取技术ASE 加速溶剂萃取技术（accelerated solvent extraction）其是一种新的液-固萃取技术。其原理是选择合适的溶剂、通过增加温度和压力来提高萃取过程的效率。是一项高效的萃取技术。姜宁等用ASE技术对开胸顺气丸中厚朴酚与和厚朴酚进行检测，结果获得了较高的提取效率，比《中国药典》2005版节省了一半的时间。 超临界流体萃SFE 超临界流体萃（Supercritical fluid extraction-SFE），是利用超临界流体对物质的特殊溶解性能原理而建立的萃取方法。超临界CO2作为常用的萃取剂已被广泛应用于天然药物中非极性和弱极性有效成分的提取。 4.3 固相萃取 SPE的基本原理是分析物在两相之间的分配，即在固相和液相之间的分配 。 SPE技术自上世纪70年代后期问世以来，以其富集倍数高、提取速度快、操作简便、 高效、可靠及耗 用溶剂量少等优点， 在环境、药物分析等 许多领域得到了快速 的发展 ,也是目前较 常用的一项技术。 4.4 微萃取 固相微萃取（SPME） 固相微萃取技术(SPME)是20世纪90年代兴起的一项新颖的样品前处理与富集技术 SPME是基于萃取涂层与样品之间的吸附一解吸平衡而建立起来的集进样、萃取、浓缩功能于一体的新颖样品制备技术。具有操作简单、方便、样品需用量小、特别适合于现场分析等特点 SPME发展至现在已有多种形式出现，包括 纤维针式固相微萃取 (Fiber SPME) 管内固相微萃取 (in-tube SPME) 固相微萃取搅拌棒技术 (SBSE)等 毛细管固相微萃取 毛细管固相微萃取是将气体或液体样品通过内壁键合了萃取剂的石英毛细管，使欲分离组分从萃取剂中解析下来，进行分析。 毛细管固相微萃取可获得比使用固相微萃取时萃取体积大十倍以上的萃取体积，使萃取的富集倍数大大提高，另外可以加速萃取平衡，可比SPME萃取头的使用寿命更长10倍以上。 液相微萃取 1996年首次提出液相微萃取第一个模型即Drop in Drop模型。该技术是在液-液萃取(LLE)的基础上发展起来的，主要是基于相平衡的原理，该技术集采样、萃取和浓缩于一体，所需有机溶剂只需要几或几十微升，是一项环境友好的新型样品前处理技术，其特别适合于环境样品中痕量、超痕量污染物的测定。 如今发展出了单滴溶剂微萃、取直接液相微萃取(DI．LPME)、顶空液相微萃取(HS．LPME)、中空纤维液相微萃取(HF．LPME)和分散液相微萃取(DLLME)。 4.5 衍生化