双特异性抗体与抗体融合蛋白.ppt

双特异性抗体 双特异性抗体 概述 构建策略 应用 概述 双特异性抗体： 抗体两个结合点表现为不同的特异性，即分别结合不同表位。 如，一个结合靶细胞（如肿瘤细胞），另一结合药物或免疫效应细胞（如蓖麻毒素、抗癌药物、细胞毒性细胞） 双特异性抗体的功用： 提高疗效，减少副作用。 主要用于靶向治疗。 构建策略 双特异性抗体的靶标 一个结合治疗靶标，另一个指向体内效应细胞 T细胞 TCR CD3 CD2 构建策略 双特异性抗体的靶标 一个结合治疗靶标，另一个指向体内效应细胞 吞噬细胞/APC FcγR、CR 构建策略 双特异性抗体的靶标 一个结合治疗靶标，另一个指向体内效应细胞 NK细胞 FcγR、CD56 双特异性抗体的效应靶 构建策略 双特异性抗体的构建方法 杂化杂交瘤技术 将具有某种特异性（如抗瘤细胞）的McAb细胞株与具有抗第二抗原（如蓖麻毒蛋白）的小鼠脾细胞进行融合，即产生出杂化杂交瘤细胞株的二价瘤体。 杂化杂交瘤技术产生的双特异性抗体 杂化杂交瘤分泌的抗体形式 保持原特异性抗体分子： L1H1-H1L1，L2H2-H2L2 重链特异性相同的配对抗体分子： L1H1-H1L2，L1H2-H2L1 L2H1-H1L2，L1H2-H2L2 重链、轻链特异性不同的配对抗体分子： L1H1-H2L2，L1H2-H1L2 L1H1-H2L1，L2H2-H1L2 只有L1H1-H2L2才是所需的双特异性抗体 杂化杂交瘤方法的不足 产量低，仅占10% 产物需筛选，费时费力 瘤株不稳定 构建策略 双特异性抗体的构建方法 化学交联法 Nisonoff和Rivers最早开始研究 化学交联无需经过细胞融合，比较简便易行。 通常利用重链与轻链这间的二硫链经还原和再氧化，将两种不同特异性抗体的半分子结合在一起。或用双功能交联剂，如邻苯酸酯等，把两个抗体半分子交联在一起。 构建策略 双特异性抗体的构建方法 化学交联法 用于制备双功能抗体的McAb可以是完整分子，也可是经胃酶水解获得F（abˊ）2片段。后者在减少鼠源免疫原性方面，效果较好。 构建策略 双特异性抗体的构建方法 基因工程技术 利用分子生物学技术设计产生双功能抗体 常见有四种构建形式，多为小分子抗体。 末端半胱氨酸残基（Cys）共价交联 在两种scFv分子C末端分别带上自由的Cys，通过常规二硫键共价交联，形成双特异性抗体 单链双特异性抗体 将两种scFv分子基因用linker连接在一起，然后表达形成双特异性抗体 微型双特异性抗体 利用专门二聚化结构将两种scFv分子连接在一起，形成双特异性抗体 如利用fos和jun基因的亮氨酸拉链序列： 双体型双特异性抗体 将两种不同抗体的VH和VL用较短的linker连接形成两种不同单链，当它们共表达时，其相互间连接在一起，形成双特异性抗体 1993，Holliger 双特异性抗体的应用 免疫诊断 肿瘤放射显影 肿瘤药物杀伤 肿瘤的免疫杀伤 乳腺癌、淋巴母细胞白血病、神经胶质瘤 抗体免疫偶联物 抗体免疫偶联物 概述 小分子药物与抗体偶联物 毒素及大分子多肽药物与抗体偶联物 应用 概述 抗体免疫偶联物 将单抗与“弹头”药物偶联在一起，以提高药物作用的特异性，主要用于肿瘤治疗。 如，Mylotarg—抗CD33单抗偶联加里奇霉素，治疗老年人急性髓细胞性白血病，2000年上市。 与单抗偶联的常用“弹头”药物 小分子药物与抗体偶联物 一个单抗可偶联一个至数十个小分子药物。 抗体分子中的多个基团可以用于连接，如巯基，氨基，羟基，胍基，羧基，糖基等。 小分子药物与抗体偶联物 直接偶联物 将药物与单抗直接连接在一起 不同的小分子药物往往需选择不同的交联剂。 2-亚胺四氢噻吩(2-IT) 可在具氨基的化合物上引入巯基 小分子药物与抗体偶联物 直接偶联物 将药物与单抗直接连接在一起 不同的小分子药物往往需选择不同的交联剂。 SPDP(N-琥珀酰亚胺-3-(2-吡啶二硫基)-丙酸酯) 可将巯基引入抗体 如，阿霉素与抗子宫内膜腺癌单抗偶联，效果提高57倍 小分子药物与抗体偶联物 直接偶联物 将药物与单抗直接连接在一起 不同的小分子药物往往需选择不同的交联剂。 PDPH(3-(2-吡啶二硫基)-丙酰肼) 可将巯基引入抗体 小分子药物与抗体偶联物 直接偶联物 将药物与单抗直接连接在一起 不同的