跑电泳.ppt

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2017-05-17 发布于湖北
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跑电泳

SDS碱裂解法制备质粒DNA的基本原理：强碱溶液可以破坏菌体细胞壁，十二烷基磺酸钠（SDS）可使细胞膜裂解。当菌体在NaOH和SDS溶液中裂解时，蛋白质与DNA发生变性，由于细菌染色体DNA比质粒大得多，易受机械力和核酸酶等的作用而被切断成不同大小的线性片段。当加入中和液后，质粒DNA可以快速复性，并以溶解状态存在于液相中。蛋白质与线性染色体DNA因难以复性而呈絮状，并与细胞碎片缠绕在一起，离心时可沉淀下来。实验一：大肠杆菌质粒的提取实验目的学习SDS-碱裂解法小量制备质粒DNA 质粒染色体外的小型双链环状DNA分子，大小1kb~200kb。多发现于细菌中。独立于染色体外进行复制和辅助性遗传单位。复制转录需要宿主酶常含有一些对宿主有利的基因。为什么学习质粒的提取方法分子生物学中大量的载体是以质粒的形式存在的。质粒的提取是分子生物学实验的基础。质粒DNA的提取细菌培养（已经完成）收集和裂解细菌提取质粒DNA 检测质粒的三种存在形式超螺旋DNA 开环DNA 线性DNA M gst M13 M13 酶切 pBS pBS 检测：取5ul溶液，加3ul loading buffer进行琼脂糖电泳所用的质粒载体 Gst基因酶切